上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂二：液体置于试剂瓶内 EP 管中，使用前需先离心。取 0.1 mL 试剂二加入 1.5 mL 试剂一混合备用（约53T），现配现用，也可根据样本量按比例配制。

产品说明：

POD（EC 1.11.1.7）广泛存在于动物、植物、微生物中，可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。POD 在有过氧化氢存在的情况下，能使愈创木酚发生氧化，生成茶褐色物质，该物质在 470nm 有最大光吸收。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、细菌、细胞或组织样本的制备

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴， 功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）， 进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样本：直接检测。

二、测定步骤

1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 470nm，蒸馏水调零。

2、 测定前将试剂一、二和三在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）放置 10min 以上。

3、 样本测定表

在 EP 管中按顺序加入上述试剂，立即混匀并计时，立即取 200µL 转移至微量玻璃比色皿或 96 孔板中，记录470nm 下 30s 时的吸光值 A1 和 1min30s 后的吸光值 A2。计算 ΔA=A2-A1。

三、POD 活性计算

a、用微量玻璃比色皿测定的计算公式如下

1、按血清（浆）体积计算

单位定义：每 mL 血清（浆）在每 mL 反应体系中每分钟 A470 变化 0.01 定义为一个酶活力单位。POD（U/mL）=ΔA÷0.01×V 反总÷V 样÷T =4900×ΔA

2、按样本蛋白浓度计算

单位定义：每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中每分钟 A470 变化 0.01 定义为一个酶活力单位。POD（U/mg prot）=ΔA÷0.01×V 反总÷（Cpr×V 样）÷T =4900×ΔA÷Cpr

3、按样本质量计算

单位定义：每 g 组织在每 mL 反应体系中每分钟 A470 变化 0.01 定义为一个酶活力单位。POD（U/g 质量）=ΔA÷0.01×V 反总÷（W÷V 样总×V 样）÷T =4900×ΔA÷W

4、按细菌或细胞数量计算

单位定义:每 1 万个细菌或细胞在每 mL 反应体系中每分钟 A470 变化 0.01 定义为一个酶活力单位。POD（U/104 cell）=ΔA÷0.01×V 反总÷（500÷V 样总×V 样）÷T =9.8×ΔA

b、用 96 孔板测定的计算公式如下

1、按血清（浆）体积计算

单位定义：每 mL 血清（浆）在每 mL 反应体系中每分钟 A470 变化 0.005 定义为一个酶活力单位。POD（U/mL）=ΔA÷0.005×V 反总÷V 样÷T =9800×ΔA

2、按样本蛋白浓度计算

单位定义：每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中每分钟 A470 变化 0.005 定义为一个酶活力单位。POD（U/mg prot）=ΔA÷0.005×V 反总÷（Cpr×V 样）÷T =9800×ΔA÷Cpr

3、按样本质量计算

单位定义：每 g 组织在每 mL 反应体系中每分钟 A470 变化 0.005 定义为一个酶活力单位。POD（U/g 质量）=ΔA÷0.005×V 反总÷（W÷V 样总×V 样）÷T =9800×ΔA÷W

4、按细菌或细胞数量计算

单位定义：每 1 万个细菌或细胞在每 mL 反应体系中每分钟 A470 变化 0.005 定义为一个酶活力单位。POD（U/104 cell）=ΔA÷0.005×V 反总÷（500÷V 样总×V 样）÷T =19.6×ΔA

V 反总：反应体系总体积，0.245mL；V 样：加入样本体积，0.005mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T： 反应时间，1min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。