上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂二：液体置于试剂瓶内 EP 管中，使用前需先离心。

2、 检测工作液的配制：A. 使用 96 孔 UV 板：取试剂二 25 μL 中加入 5mL 试剂一，充分混匀，作为工作液（约 26T），现用现配； 也可根据样本量按比例配制（提供 1 个 15 mL 空瓶）。

                                  B. 使用微量石英比色皿：取试剂二 25 μL 中加入 6.5mL 试剂一，充分混匀，作为工作液（约 34T），现用现配；也可根据样本量按比例配制（提供 1 个 15 mL 空瓶）。

产品说明：

CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是最主要的 H₂O₂ 清除酶，在活性氧清除系统中具有重要作用。

H₂O₂ 在 240nm 下有特征吸收峰，CAT 能够分解 H₂O₂，使反应溶液 240nm 下的吸光度随反应时间而下降，根据吸光度的变化率可计算出 CAT 活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、细菌、细胞或组织样本的制备：

a、细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液， 超声波破碎细菌或细胞（功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

b、组织：按照组织质量（g）：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min， 取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样本：直接检测。

二、测定步骤

1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 240nm，蒸馏水调零。

2、 测定前将 CAT 检测工作液在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min 以上。

3、在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本和 190μL 工作液，立即混匀并计时，记录 240nm 下初始吸光值 A1

和 1min 后的吸光值 A2。计算 ΔA=A1-A2。

三、CAT 活性计算

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、血清（浆）CAT 活力的计算：

单位的定义：每 mL 血清（浆）每分钟催化 1μmol H₂O₂ 降解定义为一个酶活力单位。CAT(U/mL)= [ΔA×V 反总÷（ε×d）×106]÷V 样÷T=459×ΔA

2、组织、细菌或细胞中 CAT 活力计算：

         （1） 按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化 1μmol H₂O₂ 降解定义为一个酶活力单位。CAT(U/mg prot)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×106]÷(Cpr×V 样) ÷T=459×ΔA÷Cpr

（2） 按样本质量计算：

单位的定义：每 g 组织每分钟催化 1μmol H₂O₂ 降解定义为一个酶活力单位。CAT(U/g 质量)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×106]÷（V 样÷V 样总×W）÷T=459×ΔA÷W

（3） 按细菌或细胞数量计算：

单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟催化 1μmol H₂O₂ 降解定义为一个酶活力单位。CAT(U/104 cell)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×106]÷（V 样÷V 样总×500）÷T =0.917×ΔA

V 反总：反应体系总体积，2×10-4L；ε：H₂O₂ 摩尔消光系数，43.6 L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 样： 加入样本体积，0.01mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，1min；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；500：细胞或细菌总数，500 万；106：单位换算系数，1mol=106μmol。

b.  用96 孔板测定的计算公式如下

1、血清（浆）CAT 活力的计算：

单位的定义：每 mL 血清（浆）在反应体系中每分钟催化 1μmol H₂O₂ 降解定义为一个酶活力单位。

CAT(U/mL)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×106]÷V 样÷T=764.5×ΔA

2、组织、细菌或细胞中 CAT 活力计算：

          （1） 按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化 1μmol H₂O₂ 降解定义为一个酶活力单位。CAT(U/mg prot)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×106]÷(Cpr×V 样) ÷T =764.5×ΔA÷Cpr

（2） 按样本质量计算：

单位的定义：每 g 组织在反应体系中每分钟催化 1μmol H₂O₂ 降解定义为一个酶活力单位。CAT(U/g 质量)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×106]÷（V 样÷V 样总×W）÷T=764.5×ΔA÷W

（3） 按细菌或细胞数量计算：

单位的定义：每 1 万个细菌或细胞在反应体系中每分钟催化 1μmol H₂O₂ 降解定义为一个酶活力单位。