上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂一：丙酮自备。

2、 试剂二：临用前加入 3 mL 浓盐酸充分溶解备用，用不完的试剂 4℃保存。

3、 标准品：1 mmol/mL H₂O₂ 标准液。

产品说明：

H₂O₂是生物体内最常见的活性氧分子，主要由SOD和XOD等催化产生，由CAT和POD等催化降解。H₂O₂不仅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互转化的枢纽。一方面，H₂O₂可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体；另一方面H₂O₂也是许多氧化应激反应中的关键调节因子。

H₂O₂与硫酸钛生成黄色的过氧化钛复合物，在415nm有特征吸收。

技术指标：

最低检出限：0.0027 μmol/mL

线性范围：0.0195-3 μmol/mL

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、丙酮、浓盐酸、研钵/匀浆器和冰。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

细菌或细胞样本的制备：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一，超声波破碎细菌或细胞（功率 20%，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

组织样本的制备：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

血清（浆）样本：按照每 100μL 血清（浆）加入 0.9mL 试剂一的比例充分混匀；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤

1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至415nm，蒸馏水调零。

2、 将试剂二、三和四37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min以上。

3、 如果用96孔板将则用丙酮将1mmol/mL标准液稀释为2μmol/mL的标准溶液，用微量玻璃比色皿则用丙酮将1mmol/mL标准液稀释为1μmol/mL的标准溶液。

4、 在EP管中按顺序加入下列试剂

三、H₂O₂含量计算

A、按96孔板计算

1、按照细菌、细胞数量计算：

H₂O₂含量（μmol/104 cell）=∆A测定÷(∆A标准÷C标液)×V样本÷(500×V样本÷V提取)=0.004×∆A测定÷∆A标准

2、按组织质量计算：

H₂O₂含量（μmol/g 质量）=∆A测定÷（∆A标准÷C标液）×V样本÷(V样本÷V提取×W)=2×∆A测定÷∆A标准÷W 

3、按照蛋白浓度计算：

H₂O₂含量（μmol/mg prot）=∆A测定÷（∆A标准÷C标液）×V样本÷（Cpr×V样本）=2×∆A测定÷∆A标准÷Cpr

 4、按血清（浆）体积计算：

H₂O₂含量(μmol/mL)=∆A测定÷（∆A标准÷C标液）×10=20×∆A测定÷∆A标准

500：细胞或细菌总数，万个；C标液：H₂O₂标准溶液浓度，2μmol/mL；V样本：加入的样本体积，0.25mL；W： 组织质量，g；V提取：提取过程中所用体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；10：血清稀释倍数，[0.1mL血清（浆）+0.9mL试剂一] ÷0.1mL血（浆）=10。

B、按微量玻璃比色皿计算

将公式中的C标液-2μmol/mL改为C标液-1μmol/mL进行计算即可。