过氧化氢(H2O2)含量检测试剂盒-过氧化氢(H2O2)检测试剂盒-上海液质



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货号:UPLC-MS-4547 规格:100T/96S 微量法
货号:UPLC-MS-4546 规格:50T/24S 可见分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

试剂一

液体 100 mL×1 瓶(自备)

4℃保存

试剂二

粉剂×1

4℃保存

试剂三

液体 6 mL×1

4℃保存

试剂四

液体 30 mL×1

4℃保存

标准品

液体 1 mL×1

4℃保存

溶液的配制:

1 试剂一:丙酮自备。

2 试剂二:临用前加入 3 mL 浓盐酸充分溶解备用,用不完的试剂 4℃保存。

3 标准品:1 mmol/mL H2O2 标准液。

产品说明:

H2O2是生物体内最常见的活性氧分子,主要由SOD和XOD等催化产生,由CAT和POD等催化降解。H2O2不仅是重要的活性氧之一,也是活性氧相互转化的枢纽。一方面,H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸,蛋白质等生物大分子,并使细胞膜遭受损害,从而加速细胞的衰老和解体;另一方面H2O2也是许多氧化应激反应中的关键调节因子。

H2O2与硫酸钛生成黄色的过氧化钛复合物,在415nm有特征吸收。

技术指标:

最低检出限:0.0027 μmol/mL

线性范围:0.0195-3 μmol/mL

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、丙酮、浓盐酸、研钵/匀浆器和冰。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

细菌或细胞样本的制备:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一,超声波破碎细菌或细胞(功率 20%,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

组织样本的制备:称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一进行冰浴匀浆;8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

血清(浆)样本:按照每 100μL 血清(浆)加入 0.9mL 试剂一的比例充分混匀;8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

二、测定步骤

1 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至415nm,蒸馏水调零。

2 将试剂二、三和四37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴10min以上。

3 如果用96孔板将则用丙酮将1mmol/mL标准液稀释为2μmol/mL的标准溶液,用微量玻璃比色皿则用丙酮将1mmol/mL标准液稀释为1μmol/mL的标准溶液。

4 EP管中按顺序加入下列试剂

试剂名称(μL

测定管

标准管

空白管

样本

250

 

 

标准溶液

 

250

 

试剂一

 

 

250

试剂二

25

25

25

试剂三

50

50

50

4000g,常温离心10min,弃上清,留沉淀(可先用丙酮清洗3-5次来洗去植物色素)

试剂四

250

250

250

加入试剂四溶解沉淀后,室温静置5min,取200μL 转移至微量玻璃比色皿或96 孔板中测定415nm 处吸光值(空白管只要做 1-2 次即可)。计算∆A 测定=A 测定管-A 空白管,∆A 标准=A 标准管-A 空白管。

三、H2O2含量计算

A、按96孔板计算

1、按照细菌、细胞数量计算:

H2O2含量(μmol/104 cell)=∆A测定÷(∆A标准÷C标液)×V样本÷(500×V样本÷V提取)=0.004×∆A测定÷∆A标准

2、按组织质量计算:

H2O2含量(μmol/g 质量)=∆A测定÷(∆A标准÷C标液)×V样本÷(V样本÷V提取×W)=2×∆A测定÷∆A标准÷W 

3、按照蛋白浓度计算:

H2O2含量(μmol/mg prot)=∆A测定÷(∆A标准÷C标液)×V样本÷(Cpr×V样本)=2×∆A测定÷∆A标准÷Cpr

 4、按血清(浆)体积计算:

H2O2含量(μmol/mL)=∆A测定÷(∆A标准÷C标液)×10=20×∆A测定÷∆A标准

500:细胞或细菌总数,万个;C标液:H2O2标准溶液浓度,2μmol/mL;V样本:加入的样本体积,0.25mL;W 组织质量,g;V提取:提取过程中所用体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;10:血清稀释倍数,[0.1mL血清(浆)+0.9mL试剂一] ÷0.1mL血(浆)=10。

B、按微量玻璃比色皿计算

将公式中的C标液-2μmol/mL改为C标液-1μmol/mL进行计算即可。

注意事项:

1 由于试剂一易挥发,试剂一必须先预冷再加,研磨时必须在冰上研磨。

2 本试剂盒中试剂的挥发性较高,请带一次性手套和口罩。

3 如果样本吸光值大于 1.1,建议将样本用试剂一稀释后进行测定。


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