上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂二：临用前加入 2 mL 蒸馏水，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

2、 试剂三：临用前加入 2 mL 蒸馏水充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

3、 试剂四：液体置于试剂瓶内 EP 管中。临用前加入 2 mL 蒸馏水充分溶解，用不完的试剂-分装后 20℃保存， 禁止反复冻融；

4、 试剂五：液体置于试剂瓶内 EP 管中。临用前加入 2 mL 蒸馏水充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存， 禁止反复冻融。

产品说明：

果糖 1,6-二磷酸醛缩酶（Fructose 1,6 bisphosphate aldolase，FBA）（EC4.1.2.13）是糖酵解、糖异生、磷酸戊糖途径及光合作用中参与 calvin 循环的重要酶，催化果糖 1,6-二磷酸可逆的裂解为磷酸二羟丙酮和 3-磷酸甘油醛， 广泛存在于动植物及微生物体内，在各种逆境胁迫下表现不同的响应。

果糖 1,6-二磷酸醛缩酶催化果糖 1,6-二磷酸生成 3-磷酸甘油醛和磷酸二羟丙酮，在磷酸丙糖异构酶和 α-磷酸甘油脱氢酶作用下催化 NADH 和磷酸二羟丙酮生成 NAD 和 α-磷酸甘油，340nm 处吸光值的变化可反映果糖 1,6- 二磷酸醛缩酶活性的高低。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、天平、低温离心机、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、漩涡震荡仪、超声破碎仪、冰。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

①总 FBA 酶：

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液一） 充分冰浴匀浆，然后 8000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

细菌或细胞：按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液一），冰浴超声波破碎细菌或细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 8000g， 4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

液体：直接检测。

②胞浆和叶绿体 FBA 酶的分离：

（1） 按照植物组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5-10 的比例（建议称取约 0.1g 样本，加入 1mL 提取液一），手工快速研磨或匀浆，之后于 4℃，200g 离心 5min；

（2） 弃沉淀，取上清在 4℃，8000g 离心 10min（离心时缓慢加速和降速）；

（3） 取上清用于测定胞浆 FBA 酶活性，取沉淀加 1mL 提取液二，震荡溶解后超声破碎（冰浴，200W，破碎 3s， 间歇 7s，总时间 1min），然后 4℃，8000g 离心 10min，上清即为叶绿体中 FBA 酶活性。建议测定总FBA酶活性，按照步骤①提取粗酶液，若需要分别测定胞浆和叶绿体中的FBA，则按照步骤②提取粗酶液。

二、测定步骤

1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2、 样本测定：(在微量石英比色皿/96孔UV板中分别加入下列试剂)

注意：如果检测样本量大，可以将试剂一、二、三、四、五按照5:1:1:1:1（V:V:V:V:V）的比例配成工作液待用（现配现用）。

三、FBA 酶活计算

A、按微量石英比色皿计算： 1、按蛋白浓度计算

酶活单位定义：每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。FBA 酶活（U/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×109×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr