果糖-1,6-二磷酸(FDP)含量检测试剂盒-果糖-1,6-二磷酸(FDP)含量检测试剂盒-上海液质



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购


货号:UPLC-MS-4198 规格:100T/48S 微量法
货号:UPLC-MS-4197 规格:50T/24S 可见分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

提取液一

液体 60 mL×1

4℃保存

提取液二

液体 10 mL×1

4℃保存

试剂一

液体 10 mL×1

4℃保存

试剂二

粉剂×1

4℃保存

试剂三

液体 7 mL×1

4℃保存

试剂四

液体 20 mL×1

4℃保存

标准品

粉剂×1

4℃保存

溶液的配制:

1 试剂二:临用前加入 0.3mL 蒸馏水,充分溶解后待用,用不完的试剂 4℃保存,4℃保存一周;

2 标准品:临用前加入 1176 μL 蒸馏水充分溶解,配制成 50 μmol/mL 果糖-1,6-二磷酸标准溶液。

产品说明:

果糖 1,6-二磷酸(fructose-1,6-diphosphate, FDP)是糖酵解过程中的一种重要的中间产物,对多种酶具有调节作用,具有改善细胞能量代谢、增加能量利用、抗心律失常及抗组织过氧化等作用,广泛应用于临床医药。

醛缩酶催化果糖 1,6-二磷酸裂解,产物与 2,4-二硝基苯肼在酸性介质中反应生成 2,4-二硝基苯腙,在碱性溶液中呈红棕色,在 540nm 处有特征吸收峰。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者

增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、低温台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP管。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

1. 组织:按照质量(g):提取液一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液一)加入提取液一,冰浴匀浆后于4℃,12000g离心10min,取0.8mL上清液,再加入0.16mL提取液二,4℃,12000g离心10min 后取上清待测。

2. 细胞:按照细胞数量(104个):提取液一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液一)加入提取液一,冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);于4℃,12000g离心10min,取0.8mL上清液,再加入0.16mL提取液二,4℃,12000g离心10min后取上清待测。

3. 血清(浆):取100μL血清(浆)加入1mL提取液一,4℃,12000g离心10min,取0.8mL上清液,再加入0.16mL 提取液二,4℃,12000g离心10min后取上清待测。

二、测定步骤

1 分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。

2 50µmol/mL的果糖-1,6-二磷酸标准液用蒸馏水倍比稀释为3.125、1.5625、0.78125、0.39、0.2、0.1 µmol/mL的标准溶液备用。

3 样本测定:(在1.5 mL离心管或96孔板中操作)

试剂名称(µL

对照管

测定管

空白管

标准管

样本

20

20

-

-

蒸馏水

-

-

20

-

标准溶液

-

-

-

20

试剂一

44

40

44

40

试剂二

-

4

-

4

充分混匀,37℃准确反应2 h

试剂三

40

40

40

40

充分混匀,37℃准确反应20 min

试剂四

100

100

100

100

充分混匀,37℃准确反应10 min

于微量玻璃比色皿/96孔板中测定540nm处吸光值A,分别记为A对照管、A测定管、A空白管和A标准管。计算ΔA=A测定管-A对照管,ΔA标准=A标准管-A空白管。(空白需检测1-2次)

三、FDA 含量计算

1 标准曲线的绘制:

以各个标准溶液的浓度为 x 轴,其对应的 ΔA 标准为 y 轴,绘制标准曲线,得到标准方程 y= kx+b,将 ΔA 带入方程得到 x(µmol/mL)。

2、FDP 含量的计算:

          (1) 按样本质量计算

FDP 含量(µg/g  质量)=x×(V 上清+V 提取液二)×M÷(W×V 上清÷V 提取液一)=408x÷W

(2) 按细胞数量计算

FDP 含量(µg/104 cell)=x×(V 上清+V 提取液二)×M÷(V 上清÷V 提取液一×细胞数量(万个))=408x÷细胞数量(万个)

(3) 按液体体积计算

FDP含量(µmol/mL)=x×(V上清+V提取液二)÷ [V液体×V上清÷(V提取液一+V液体)]=13.2x

V 上清:提取时上清液体积,0.8mL;V 提取液二:提取液二的体积,0.16mL;V 提取液一:提取液一的体积,1mL; W:样本质量,g;M:果糖-1,6-二磷酸分子质量,340;V 液体:液体样本体积,0.1mL。

注意事项:

当ΔA测定大于0.5时,建议将样本用蒸馏水稀释后再进行测定,计算公式中乘以稀释倍数。


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