果胶酯酶(PE)活性检测试剂盒-果胶酯酶(PE)试剂盒-上海液质



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货号:UPLC-MS-5045 规格:100T/96S NaOH 滴定法
货号:UPLC-MS-5045 规格:50T/48S NaOH 滴定法
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

50T 规格

100T 规格

保存条件

提取液

粉剂×1

粉剂×2

室温保存

试剂一

粉剂×1

粉剂×1

室温保存

试剂二

液体 1.5mL×1

液体 3mL×1

2-8℃保存

试剂三

液体 10mL×1

液体 20mL×1

2-8℃保存

50T 溶液的配制:

1 提取液:临用前加入 100mL 蒸馏水,充分溶解;用不完的试剂 4℃避光可保存 3 个月;

2 试剂一:临用前加入 100mL 蒸馏水,磁力搅拌 50℃加热溶解 3 小时左右至完全溶解,转移至 250mL 容量瓶,蒸馏水定容至 250mL;用不完的试剂 4℃可保存 8 周;(因试剂一较难配制,建议客户提前制备

3 试剂三工作液:临用前根据样本量取出部分试剂三,用蒸馏水稀释 16 倍得到试剂三工作液备用,现配现用,用不完的试剂 4℃可保存 1 周;

100T 溶液的配制:

1 提取液:临用前取 1 瓶加入 100 mL 蒸馏水,充分溶解;用不完的试剂 4℃避光可保存 3 个月;

2 试剂一:临用前加入 100mL 蒸馏水,磁力搅拌 50℃加热溶解 3 小时左右至完全溶解,转移至 500mL 容量瓶,蒸馏水定容至 500mL;用不完的试剂 4℃可保存 8 周;(因试剂一较难配制,建议客户提前制备

3 试剂三工作液:临用前根据样本量取出部分试剂三,用蒸馏水稀释 16 倍得到试剂三工作液备用,现配现用,用不完的试剂 4℃可保存 1 周;

产品说明:

果胶酯酶(Pectinesterase,PE),又称果胶甲基酯酶、果胶氧化酶,广泛存在于植物及微生物中。果胶是构成植物细胞壁的主要成分之一,而果胶酯酶催化果胶的甲氧酯水解产生果胶酸和甲醇,在植物果实成熟的细胞壁代谢过程中发挥着重要作用,在食品工业中具有极其重要的作用和开发前景。果胶酯酶催化果胶水解的过程中释放H+,反应体系pH值降低,通过加入碱液维持反应体系pH始终维持在7.8维持pH所消耗的碱液量可反映果胶酯酶的活性。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果试剂三工作液消耗量过大或过小,建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、天平、研钵/匀浆器、10mL离心管或试管、容量瓶、冰和蒸馏水。

一、样本处理

1、将研钵/匀浆器与提取液置于冰上或 4℃预冷 10min。

2、按照样本质量(g):提取液体积(mL)=1:3~5 的比例(建议称取约 0.5g 样本,加入 1.5mL 提取液)加入提取液,冰浴匀浆后,于 4℃,12000g 离心 10min,弃沉淀,取全部上清液置于冰上待测。

二、测定步骤

1 将试剂一置于37℃水浴锅中保温10min以上。

2 依次在10mL离心管或试管中加入1mL上清液、25μL试剂二和4mL试剂一,充分混匀,用试剂三工作液调节pH至7.8(粉红色)。

3 将上述离心管或试管置于37℃恒温培养箱/水浴锅中准确反应60min,每隔20min用试剂三工作液调节pH,使其维持在7.8(粉红色),并记录下所消耗试剂三工作液的体积,记为V(mL)。

三、果胶酯酶活性计算

酶活单位定义:每g组织样本每分钟消耗1μmol NaOH的量为一个酶活力单位。PE活性(U/g 质量)=25×V÷V上清×V提÷W÷T×F=1.25×V×F

V:消耗试剂三工作液的体积,mL;V上清:加入的上清液体积,1mL;V提:加入的提取液体积,1.5mL;W 样本质量,g;T:反应时间,60min;F:稀释倍数。

注意事项:

1 实验中酶促反应产生 H+,此时溶液无色透明,需用试剂三调节 pH 7.8(粉红色),即溶液会从无色透明突然变为粉红色。

2 建议正式实验前进行预实验,其中测定步骤 2 中,将样本上清液、加入试剂二和试剂一混匀后,用试剂三工作液调节 pH 7.8(粉红色)时,可适当调整每次加入试剂三工作液的体积,防止 pH 调过。

3 若样本酶活性较高,可适当稀释样本上清液后再进行测定,计算酶活时乘以稀释倍数即可。若样本酶活性较低, 建议客户加大样本量后重新进行测定,注意同步修改计算公式。


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