果胶酶活性检测试剂盒-果胶酶试剂盒-上海液质



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购


货号:UPLC-MS-4141 规格:100T/48S 微量法
货号:UPLC-MS-4140 规格:50T/24S 可见分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

提取液

液体 100mL×1

4℃保存

试剂一

液体 25mL×1

4℃保存

试剂二

液体 20 mL×1

4℃保存

标准品

粉剂×1

4℃保存

溶液的配制:

1、试剂一:若溶液中有不溶解物质,可以 50℃水浴溶解。

2、标准品:10mg 半乳糖醛酸。临用前加入 0.943mL 蒸馏水,配成 50μmol/mL 的标准液。

产品说明:

果胶酶(pectinase)是分解果胶的酶类,包括原果胶酶,果胶酯酶,多聚半乳糖醛酸酶和果胶裂解酶四大类, 广泛存在于高等植物果实和微生物中,是水果加工中最重要的酶。

果胶酶水解果胶生成半乳糖醛酸,半乳糖醛酸与 DNS 试剂反应生成在 540nm 有特征吸收峰的棕红色物质, 测定 540nm 处吸光值变化可计算得果胶酶活性。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96 孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

1、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL) 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液 进行冰浴匀浆,然后 10000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。

2、菌类:按照细菌数量(104 个):提取液体积(mL) 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细菌(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 10000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。

3、液体:直接检测。

二、测定步骤

1 可见分光光度计/酶标仪预热30min 以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。

2 50μmol/mL  标准液用蒸馏水稀释为 10、8、6、4、2、1 μmol/mL 的标准溶液备用。

3 40μL 样本沸水浴 10min 备用。

4 样本测定(在1.5mL离心管中):

 

对照管

测定管

标准管

空白管

试剂一(µL

200

200

200

200

50℃水浴温育5min

标准溶液(µL

-

-

40

-

样本(µL

-

40

-

-

蒸馏水(µL

-

-

-

40

煮沸样本(µL

40

-

-

-

混匀,50℃水浴反应30min,马上沸水浴5min,冷却后8000g,常温离心10min,取上清。

上清液(µL

150

150

150

150

试剂二(µL

150

150

150

150

沸水浴5min,冰浴冷却终止反应,吸取200μL于微量玻璃比色皿或96孔板中测定540nm处吸光值A,计算

ΔA=A测定管-A对照管,ΔA标准=A标准管-A空白管。每个测定管需设一个对照管。

三、果胶酶活性计算

1 标准曲线的绘制:

以各个标准溶液的浓度为 x 轴,其对应的 ΔA 标准为 y 轴,绘制标准曲线,得到标准方程 y=kx+b,将 ΔA 带入方程得到 x(μmol/mL)。

2 果胶酶活性的计算:

          (1) 按蛋白浓度计算

酶活定义:在 50℃,pH3.5 条件下,每毫克蛋白每小时分解果胶产生 1μmol 半乳糖醛酸为 1 个酶活力单位。果胶酶活性(U/mg prot)=x×V 提取÷(V 提取×Cpr)÷T= 2x÷Cpr

(2) 按样本质量计算

酶活定义:在 50℃,pH3.5 条件下,每克样本每小时分解果胶产生 1μmol 半乳糖醛酸为 1 个酶活力单位。果胶酶活性(U/g 质量)= x×V 提取÷W÷T=2x÷W

(3) 按照细菌数量计算

酶活定义:在 50℃,pH3.5 条件下,每 104 个细菌每小时分解果胶产生 1μmol 半乳糖醛酸为 1 个酶活力单位。果胶酶活性(U/104 cell)= x×V 提取÷T÷细菌数量(万个)=2x÷细菌数量(万个)

(4) 按液体体积计算

酶活定义:在 50℃,pH3.5 条件下,每 mL 样本每小时分解果胶产生 1μmol 半乳糖醛酸为 1 个酶活力单位。果胶酶活性(U/mL)= x×V 样÷V 样÷T= 2x

V 提取:提取液体积,1mL V 样:加入的样本体积,0.04mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;T:反应时间,0.5h。

注意事项:

1 A 大于 1.5 时,建议将样本用提取液稀释后再进行测定。

2 植物果实组织建议将样本用提取液稀释 10 倍或 20 倍后再测定。


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