上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购

溶液的配制：

1、 试剂一：临用前加入 3.3 mL 稀释液，充分溶解；

2、 试剂二：临用前按 2 μL 试剂二：10 mL 蒸馏水的比例稀释试剂二，现用现配；

3、 试剂三：瓶底若有结晶可 50℃水浴溶解，此溶液为饱和溶液，若底部最终还有结晶，吸取上清使用即可；

4、 标准品：10 mg 还原型谷胱甘肽。临用前加入 0.405 mL 稀释液溶解为 80 μmol/mL 的标准溶液备用。

产品说明：

谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase, GSH-Px 或 GPX）是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶。GPX 能够催化还原型谷胱甘肽（GSH）生成氧化型谷胱甘肽（GSSG），使有毒的过氧化氢还原成无毒的羟基化合物。

GPX 催化 H₂O₂ 氧化 GSH，产生 GSSG，GSH 能与 DTNB 生成在 412nm 处有特征吸收峰的化合物，412nm 下吸光度的下降即可反应 GPX 的活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、天平、台式离心机、微量玻璃比色皿/96 孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP 管。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、组织：按照组织质量（g）:提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例（建议称取 0.05 g 组织，加入 1 mL 提取液）进行冰浴匀浆。5000 rpm，4℃离心 10 min，取上清置冰上待测 (如上清不清澈可以离心更长时间)。

2、细菌、细胞：按照细胞数量 104 个：提取液体积（mL）500~1000:1 的比例（建议 500 万细胞加入 1 mL 提取液）， 冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3s，间隔 7s，总时间 3 min）然后 5000 rpm，4℃，离心 10min，取上清置冰上待测 (如上清不清澈可以离心更长时间)。

3、血清（浆）等液体：直接测定。

二、测定步骤

1、 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 412 nm，蒸馏水调零。

2、 将 80 μmol/mL 标准液用稀释液稀释为 0.08 μmol/mL 的标准溶液，现用现配。

3、 操作表：(在 1.5 mL 离心管中依次加入下列试剂)

充分混匀，室温静置 15 min，测定 412 nm 下的吸光度，分别记为 A 测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管。计算 ΔA 测定=A 对照管-A 测定管，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。

三、GPX 活性计算

1、 抑制百分率的计算

抑制百分率=(A 对照管-A 测定管) ÷（A 对照管-A 空白管）× 100%

尽量使样本的抑制百分率在 30-70%范围内，越靠近 50%越准确。如果计算出来的抑制百分率小于 30%或大于70%，则通常需要调整加样量后重新测定。如果测定出来的抑制百分率偏高，则需适当稀释样本；如果测定出来的抑制百分率偏低，则需重新准备浓度比较高的待测样本。

2、 GPX 活性计算

          （1） 按蛋白浓度计算

活力单位定义：每 mg 蛋白在反应体系中每分钟催化 1 nmol GSH 氧化定义为一个酶活力单位。GPX (U/mg prot) =ΔA 测定÷（ΔA 标准÷C 标）×1000×V 酶促÷（Cpr×V 样）÷T=200×ΔA 测定÷ΔA 标准÷Cpr

（2） 按样本质量计算