上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

溶液配制：

试剂三：临用前加 2 mL 蒸馏水溶解。

产品说明：

GST 是一种具有多种生理功能的蛋白质家族，主要存在于细胞质内。GST 是体内解毒酶系统的重要组成部分， 主要催化各种化学物质及其代谢产物与 GSH 的巯基共价结合，使亲电化合物变为亲水物质，易于从胆汁或尿液中排泄，达到将体内各种潜在或具备毒性的物质降解并排出体外的目的。因此，GST 在保护细胞免受亲电子化合物的损伤中发挥着重要的生物学功能。此外，因为 GST 具有 GSH-Px 活性，亦称为 non-Se GSH-Px，具有修复氧化破坏的大分子如 DNA、蛋白质等的功能。注意，GST 催化的反应减少 GSH 含量，但是不增加 GSSG 含量。

GST 催化 GSH 与 CDNB 结合，其结合产物的光吸收峰波长为 340nm；通过测定 340nm 波长处吸光度上升速率，即可计算出 GST 活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

自备仪器和用品：

低温离心机、水浴锅、可调节移液器、紫外-可见分光光度计/酶标仪、研钵/匀浆器、微量石英比色皿/96 孔 UV

板和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一） 进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。

2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 8000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

3 . 血清等液体：直接测定。

二、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上，调节波长到 340nm，用蒸馏水调零。

2. 试剂二放在 25℃（一般物种）或者 37℃（哺乳动物）保温.

3. 空白管：取微量石英比色皿，加入 20μL 试剂一，180μL 试剂二和 20μL 试剂三，迅速混匀后于 340nm 测定 10s吸光度记 A1，在 25℃（一般物种）或者 37℃（哺乳动物）水浴 5min 后，快速取出测定吸光度记 A2。

4. 测定管：取微量石英比色皿，加入 20μL 上清液，180μL 试剂二和 20μL 试剂三，迅速混匀后于 340nm 测定 10s吸光度记 A3，25℃（一般物种）或者 37℃（哺乳动物）水浴 5min 后，快速取出测定吸光度记 A4。

三、GST 活性计算

         a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、按蛋白浓度计算

活性单位定义：在 25℃或者 37℃中，每毫克蛋白每分钟催化 1μmol CDNB 与 GSH 结合为一个酶活性单位。GST（U/mg prot）=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷(ε×d)×106×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T=0.23×[(A4-A3)-(A2-A1)]÷Cpr

2、按样本质量计算

活性单位定义：在 25℃或者 37℃中，每克样本每分钟催化 1μmol CDNB 与 GSH 结合为一个酶活性单位。GST（U/g 质量）=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷(ε×d)×106×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)÷T=0.23×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷W

3、按细胞数量计算

活性单位定义：在 25℃或者 37℃中，每 104 个细胞每分钟催化 1μmol CDNB 与 GSH 结合为一个酶活单位。

GST（ U/104 cell） =[(A4-A3)-(A2-A1)]÷(ε×d)×106×V 反总÷(500×V 样÷V 样总)÷T =0.23× [(A4-A3)-(A2-A1)]÷500

4、按液体体积计算

活性单位定义：在 25℃或者 37℃中，每毫升液体每分钟催化 1μmol CDNB 与 GSH 结合为一个酶活单位。GST（U/mL）= [(A4-A3)-(A2-A1)]÷(ε×d)×106×V 反总÷V 样÷T =0.23×[(A4-A3)-(A2-A1)]

ε：产物摩尔消光系数，9.6×103L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；106：单位换算系数，1mol=1×106μmol；V 反总：反应体系总体积，220μL=2.2×10-4L；Cpr：上清液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；W  ：样本质量，g；V样：加入反应体系中上清液体积，20μL=0.02mL；V 样总：试剂一体积，1mL；T：反应时间，5min；500：细胞数量，500 万。

b.  使用96 孔板测定的计算公式如下

1、按蛋白浓度计算

活性单位定义：在 25℃或者 37℃中，每毫克蛋白每分钟催化 1μmol CDNB 与 GSH 结合为一个酶活性单位。GST（U/mg prot）=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷(ε×d)×106×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T=0.38×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷Cpr

2、按样本质量计算

活性单位定义：在 25℃或者 37℃中，每克样本每分钟催化 1μmol CDNB 与 GSH 结合为一个酶活性单位。GST（U/g 质量）=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷(ε×d)×106×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)÷T =0.38×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷W

3、按细胞数量计算

活性单位定义：在 25℃或者 37℃中，每 104 个细胞每分钟催化 1μmol CDNB 与 GSH 结合为一个酶活单位。

GST（U/104 cell）=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷(ε×d)×106×V 反总÷(500×V 样÷V 样总)÷T =0.38×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷500

4、按液体体积计算

活性单位定义：在 25℃或者 37℃中，每毫升液体每分钟催化 1μmol CDNB 与 GSH 结合为一个酶活单位。GST（U/mL）=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷(ε×d)×106×V 反总÷V 样÷T=0.38×[(A4-A3)-(A2-A1)]

ε：产物摩尔消光系数，9.6×103L/mol/cm；d：96 孔板光径，0.6cm；106：单位换算系数，1mol=1×106μmol；V 反总：反应体系总体积，220μL=2.2×10-4L；Cpr：上清液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；W  ：样本质量，g；V样：加入反应体系中上清液体积，20μL=0.02mL；V 样总：加入试剂一体积，1 mL；T：反应时间，5min；500： 细胞数量，500 万。