上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂一：提供 1 个 8 mL 棕瓶；临用前取 1 支试剂一倒入空瓶中，用 2 mL 蒸馏水溶解，再用溶液将试剂一残留试剂润洗下来；

2、 标准液：20 μmol/mL 丙酮酸钠。

产品说明：

谷丙转氨酶又叫丙氨酸氨基转移酶（EC 2.6.1.2），GPT（EC 2.6.1.2）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化氨基酸和酮酸转氨基反应，在氨基酸代谢中具有重要作用。此外，哺乳动物肝细胞GPT活性很高， 当肝细胞坏死，GPT释放到血液中，血清GPT活性显著增高。因此，GPT被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。

GPT催化丙氨酸和α-酮戊二酸发生转氨基反应，生成丙酮酸和谷氨酸；加入2,4-二硝基苯肼溶液，不仅终止上述反应，而且与酮酸中的羰基加成，生成丙酮酸苯腙；苯腙在碱性条件下呈红棕色，可以在505nm读取吸光值并计算酶活力。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、细胞或细菌的制备：先收集细胞或细菌样本到离心管内，弃上清，按照每 500 万细胞或细菌加入 1mL 提取液，超声波破碎细胞或细菌（功率 20%，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）。3500g，4℃离心 10min，取上清， 置冰上待测。

2、组织：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。3500g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）样本：直接检测。

二、测定步骤

1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至505nm，蒸馏水调零。

2、标准曲线的稀释：首先将标准品用蒸馏水稀释至2μmol/mL，按下表混合标准品和试剂一得到浓度梯度标准管：

3、在EP管或在96孔板中加入下列试剂

混匀后，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）反应30mi

注：0μmol/mL 标准管为空白管。

三、GPT 活性计算

        1. 标准曲线的绘制：

以各标准溶液浓度为x轴，以∆A（A标准管-A空白管）为y轴做标准曲线，得到方程y=kx+b。将（A测定管-A 对照管）带入方程求x值。

2. GPT活性计算：

 （1） 按样本质量计算：

单位定义：每小时每g样本催化产生1μmol丙酮酸的量为一个GPT活力单位。

GPT（U/g 质量）=x×（V样本+V试剂一）÷（W×V样本÷V样总）÷T=12x÷W

（2） 按样本蛋白浓度计算：

单位定义：每小时每mg组织蛋白催化产生1μmol丙酮酸的量为一个GPT活力单位。

GPT（U/mg prot）=x×（V样本+V试剂一）÷（Cpr×V样本）÷T=12x÷Cpr

（3） 按血清（浆）体积计算：