谷丙转氨酶(GPT/ALT)活性检测试剂盒-谷丙转氨酶(GPT/ALT)试剂盒-上海液质



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购


货号:UPLC-MS-4445 规格:100T/48S 微量法
货号:UPLC-MS-4444 规格:50T/24S 可见分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

提取液

液体 60 mL×1

4℃保存

试剂一

粉剂×2

4℃保存

试剂二

液体 3.5 mL×1

4℃保存

试剂三

液体 30 mL×1

4℃保存

标准液

液体 1 mL×1

4℃保存

溶液的配制:

1 试剂一:提供 1 8 mL 棕瓶;临用前取 1 支试剂一倒入空瓶中,用 2 mL 蒸馏水溶解,再用溶液将试剂一残留试剂润洗下来;

2 标准液:20 μmol/mL 丙酮酸钠。

产品说明:

谷丙转氨酶又叫丙氨酸氨基转移酶(EC 2.6.1.2),GPT(EC 2.6.1.2)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化氨基酸和酮酸转氨基反应,在氨基酸代谢中具有重要作用。此外,哺乳动物肝细胞GPT活性很高, 当肝细胞坏死,GPT释放到血液中,血清GPT活性显著增高。因此,GPT被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。

GPT催化丙氨酸和α-酮戊二酸发生转氨基反应,生成丙酮酸和谷氨酸;加入2,4-二硝基苯肼溶液,不仅终止上述反应,而且与酮酸中的羰基加成,生成丙酮酸苯腙;苯腙在碱性条件下呈红棕色,可以在505nm读取吸光值并计算酶活力。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

1、细胞或细菌的制备:先收集细胞或细菌样本到离心管内,弃上清,按照每 500 万细胞或细菌加入 1mL 提取液,超声波破碎细胞或细菌(功率 20%,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次)。3500g,4℃离心 10min,取上清, 置冰上待测。

2、组织:称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。3500g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

3、血清(浆)样本:直接检测。

二、测定步骤

1 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至505nm,蒸馏水调零。

2、标准曲线的稀释:首先将标准品用蒸馏水稀释至2μmol/mL,按下表混合标准品和试剂一得到浓度梯度标准管:

标准品(μL

试剂一(μL

标准管浓度(μmol/mL

22.5

7.5

1.5

15

15

1

12

18

0.8

6

24

0.4

3

27

0.2

1.5

28.5

0.1

0.75

29.25

0.05

0

30

0

3、在EP管或在96孔板中加入下列试剂

试剂名称(μL

测定管

对照管

标准管

待测样本

5

 

 

试剂一

25

25

 

标准液

 

 

30

混匀后,37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)反应30mi

试剂二

25

25

25

待测样本

 

5

 混匀后,37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)准确反应20min 

试剂三

240

240

240

混匀,室温放置10min,在505nm波长处测各管吸光度。

注:0μmol/mL 标准管为空白管。

三、GPT 活性计算

        1. 标准曲线的绘制:

以各标准溶液浓度为x轴,以∆A(A标准管-A空白管)为y轴做标准曲线,得到方程y=kx+b。将(A测定管-A 对照管)带入方程求x值。

2. GPT活性计算:

 (1) 按样本质量计算:

单位定义:每小时每g样本催化产生1μmol丙酮酸的量为一个GPT活力单位。

GPT(U/g 质量)=x×(V样本+V试剂一)÷(W×V样本÷V样总)÷T=12x÷W

(2) 按样本蛋白浓度计算:

单位定义:每小时每mg组织蛋白催化产生1μmol丙酮酸的量为一个GPT活力单位。

GPT(U/mg prot)=x×(V样本+V试剂一)÷(Cpr×V样本)÷T=12x÷Cpr

(3) 按血清(浆)体积计算:

单位定义:每小时每mL血清(浆)样本催化产生1μmol丙酮酸的量为一个GPT活力单位。

GPT(U/mL)=x×(V样本+V试剂一)÷V样本÷T=12x

(4) 按细胞或细菌数量计算:

单位定义:每小时每104个细胞或细菌催化产生1μmol丙酮酸的量为一个GPT活力单位。

GPT(U/104 cell)=x×(V样本+V试剂一)÷(500×V样本÷V样总)÷T=0.024x

V样本:样本体积,0.005mL;V试剂一:试剂一体积,0.025mL;V样总:提取液体积,1mL;W:样本质量,g;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;T:反应时间,0.5h;500:细胞或细菌总数,500万。


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