谷氨酰胺酶(GLS)活性检测试剂盒-谷氨酰胺酶(GLS)试剂盒-上海液质



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购


货号:UPLC-MS-4447 规格:100T/48S 微量法
货号:UPLC-MS-4446 规格:50T/24S 可见分光光度法
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

提取液

液体 70 mL×1

4℃保存

试剂一

粉剂×1

4℃保存

试剂二 A

液体 1 mL×1

4℃保存

试剂二 B

液体 4 mL×1

4℃保存

试剂三

液体 5 mL×1

常温保存

标准品

液体 1 mL×1

4℃保存

溶液的配制:

1 提取液:使用前 37℃预热;

2 试剂一:临用前加入 10 mL 提取液充分溶解待用;

3 试剂二 B:临用前将试剂二 A 倒入试剂二 B 中混匀(A:B=1:4 比例),或者根据样本所需,按照体积比试剂二 A:试剂二 B=1:4 现配现用;

4 标准品:10 μmol/mL 氮标准液,使用前 37℃预热。

产品说明:

GLS(EC3.5.1.2)主要存在于高等动物和某些细菌以及植物根中,催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨,在氮素代谢中具有重要调控作用,尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。

本试剂盒利用靛酚蓝比色法测定 GLS 催化谷氨酰胺生成的氨来计算其酶活性。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

台式离心机、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和双蒸水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

1. 组织:按照质量(g):蒸馏水体积(mL) 1:5-10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液),冰上匀浆后于4℃,12000g离心15min,取上清置于冰上待测。

2. 细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500-1000:1的比例(建议500万个细胞加入1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3s,间隔7s,总时间3min);然后4℃,12000g  离心15 min,取上清置于冰上待测。

二、测定步骤

1. 分光光度计预热30min以上,调节波长至630nm,蒸馏水调零。

2. 标准液的制备:将标准溶液用提取液稀释32倍得0.3125μmol/mL的标准溶液。

3. 样本测定:(在EP管中加入下列试剂)

试剂名称(µL

测定管

对照管

标准管

空白管

样本

80

80

-

-

提取液

-

320

-

400

试剂一

320

-

-

-

混匀,37℃水浴1小时

-

-

标准液

-

-

400

-

试剂二

80

80

80

80

试剂三

60

60

60

60

蒸馏水

460

460

460

460

混匀,室温放置 30min,630nm 处读取吸光值 A,分别记为 A 测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管,计 ΔA=A 测定管-A 对照管,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。

三、GLS 酶活性计算

1、按样本蛋白浓度计算

单位定义:37℃下每 mg 蛋白质每小时催化谷氨酰胺生成 1μmol NH3-N 定义为一个酶活力单位。GLS(U/mg prot)=ΔA÷(ΔA 标准÷C 标准)×V 酶促÷(V 样本×Cpr)÷T=1.5625×ΔA÷ΔA 标准÷Cpr

2、按样本质量计算

单位定义:37℃下每 g 组织每小时催化谷氨酰胺生成 1μmol NH3-N 定义为一个酶活力单位。GLS(U/g 质量)=ΔA÷(ΔA 标准÷C 标准)×V 酶促÷(W÷V 提取×V 样本)÷T=1.5625×ΔA÷ΔA 标准÷W

3、按细胞数量计算

单位定义:37℃下每 500 万个细胞每小时催化谷氨酰胺生成 1μmol NH3-N 定义为一个酶活力单位。GLS(U/104 cell)=ΔA÷(ΔA 标准÷C 标准)×V 酶促÷(V 样本÷V 提取)÷T=1.5625×ΔA÷ΔA 标准

C 标准:标准液浓度,0.3125μmol/mL;V 酶促:酶促反应体积,0.4mL;V 提取:加入提取液体积,1mL;V 样本:上清液体积,0.08mL;T:反应时间,1h;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。

注意事项:

1 当测定吸光值大于 0.7 时,建议将上清液用提取液进一步稀释后测量,计算时乘以稀释倍数。

2 试剂二配置后尽快使用,若发现变色则不能再用。


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