货号:UPLC-MS-4447 | 规格:100T/48S | 微量法 |
货号:UPLC-MS-4446 | 规格:50T/24S | 可见分光光度法 |
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
提取液 |
液体 70 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂一 |
粉剂×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂二 A |
液体 1 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂二 B |
液体 4 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂三 |
液体 5 mL×1 瓶 |
常温保存 |
标准品 |
液体 1 mL×1 支 |
4℃保存 |
溶液的配制:
1、 提取液:使用前 37℃预热;
2、 试剂一:临用前加入 10 mL 提取液充分溶解待用;
3、 试剂二 B:临用前将试剂二 A 倒入试剂二 B 中混匀(A:B=1:4 比例),或者根据样本所需,按照体积比试剂二 A:试剂二 B=1:4 现配现用;
4、 标准品:10 μmol/mL 氮标准液,使用前 37℃预热。
GLS(EC3.5.1.2)主要存在于高等动物和某些细菌以及植物根中,催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨,在氮素代谢中具有重要调控作用,尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。
本试剂盒利用靛酚蓝比色法测定 GLS 催化谷氨酰胺生成的氨来计算其酶活性。
需自备的仪器和用品:
台式离心机、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和双蒸水。
试剂名称(µL) |
测定管 |
对照管 |
标准管 |
空白管 |
样本 |
80 |
80 |
- |
- |
提取液 |
- |
320 |
- |
400 |
试剂一 |
320 |
- |
- |
- |
混匀,37℃水浴1小时 |
- |
- |
||
标准液 |
- |
- |
400 |
- |
试剂二 |
80 |
80 |
80 |
80 |
试剂三 |
60 |
60 |
60 |
60 |
蒸馏水 |
460 |
460 |
460 |
460 |
混匀,室温放置 30min,630nm 处读取吸光值 A,分别记为 A 测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管,计算 ΔA=A 测定管-A 对照管,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。
1、按样本蛋白浓度计算
单位定义:37℃下每 mg 蛋白质每小时催化谷氨酰胺生成 1μmol NH3-N 定义为一个酶活力单位。GLS(U/mg prot)=ΔA÷(ΔA 标准÷C 标准)×V 酶促÷(V 样本×Cpr)÷T=1.5625×ΔA÷ΔA 标准÷Cpr
2、按样本质量计算
单位定义:37℃下每 g 组织每小时催化谷氨酰胺生成 1μmol NH3-N 定义为一个酶活力单位。GLS(U/g 质量)=ΔA÷(ΔA 标准÷C 标准)×V 酶促÷(W÷V 提取×V 样本)÷T=1.5625×ΔA÷ΔA 标准÷W
3、按细胞数量计算
单位定义:37℃下每 500 万个细胞每小时催化谷氨酰胺生成 1μmol NH3-N 定义为一个酶活力单位。GLS(U/104 cell)=ΔA÷(ΔA 标准÷C 标准)×V 酶促÷(V 样本÷V 提取)÷T=1.5625×ΔA÷ΔA 标准
C 标准:标准液浓度,0.3125μmol/mL;V 酶促:酶促反应体积,0.4mL;V 提取:加入提取液体积,1mL;V 样本:上清液体积,0.08mL;T:反应时间,1h;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。
1、 当测定吸光值大于 0.7 时,建议将上清液用提取液进一步稀释后测量,计算时乘以稀释倍数。
2、 试剂二配置后尽快使用,若发现变色则不能再用。
独立公正 方法科学 规范严谨 服务周到