谷氨酰胺合成酶(GS)活性检测试剂盒-谷氨酰胺合成酶(GS)试剂盒-上海液质



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购


货号:UPLC-MS-4449 规格:100T/48S 微量法
货号:UPLC-MS-4448 规格:50T/24S 可见分光光度法
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

提取液

液体 30 mL×1

4℃保存

试剂一

液体 10 mL×1

-20℃保存

试剂二

液体 10 mL×1

-20℃保存

试剂三

粉剂×2

-20℃保存

试剂四

液体 15 mL×1

4℃保存

溶液的配制:

试剂三:临用前每瓶加入 5mL 蒸馏水充分溶解备用,用不完的试剂仍-20℃分装保存。

产品说明:

GS(EC 6.3.1.2)主要存在于植物中,是生物体内氨同化的关键酶之一,催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺, 不仅可以防止过多的铵离子对生物有毒性,而且谷氨酰胺也是氨的主要储存和运输形式。

GS 在ATP和Mg2+存在下,催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺;谷氨酰胺进一步转化为γ-谷氨酰基异羟肟酸, 在酸性条件下与铁形成红色的络合物;该络合物在540nm处有最大吸收峰。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL) 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功 20% 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL) 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

血清(浆)样本:直接检测。

二、测定步骤

1 分光光度计预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。

2 EP管中加入下列试剂:


试剂名称(μL

测定管

对照管

试剂一

320

 

试剂二

 

320

试剂三

140

140

样本

140

140

混匀,37℃(哺乳动物)或25℃(其他物种)准确水浴30min

试剂四

200

200

混匀,静置 10min 后,5000g,常温离心 10min,取上清液测定 540nm 处的吸光值 A。ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管需设一个对照管。

三、GS 活力单位的计算

     1. 血清(浆)GS活性

单位定义:每mL血清(浆)在每mL反应体系中每min使540nm下吸光值变化0.01定义为一个酶活力单位。

GS(U/mL)=ΔA×V反总÷V样÷0.01÷T =19×ΔA

2. 组织、细菌或细胞GS活性

(1) 按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白在每mL反应体系中每min使540nm下吸光值变化0.01定义为一个酶活力单位。

GS(U/mg prot)=ΔA×V反总÷(Cpr×V样)÷0.01÷T =19×ΔA÷Cpr

(2) 按样本质量计算:

单位的定义:每g组织在每mL反应体系中每min使540nm下吸光值变化0.01定义为一个酶活力单位。

GS(U/g 质量)=ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.01÷T =19×ΔA÷W

(3) 按细菌或细胞数量计算:

单位定义:每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每min使540nm下吸光值变化0.01定义为一个酶活力单位。

GS(U/104 cell)=ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.01÷T =0.038×ΔA

V反总:反应体系总体积,0.8mL;V样:加入样本体积,0.14mL;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,30min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。

注意事项:

试剂一、试剂二可能会有析出,可以重悬后使用,反应后取上清测定。


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