多酚氧化酶(PPO)活性检测试剂盒-多酚氧化酶(PPO)试剂盒-上海液质



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购


货号:UPLC-MS-4537 规格:100T/48S 微量法
货号:UPLC-MS-4536 规格:50T/24S 可见分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

提取液

液体 60 mL×1

4℃保存

粉剂一

粉剂×1

4℃保存

试剂一

液体 40 mL×1

4℃保存

试剂二

液体 10 mL×1

4℃保存

溶液的配制:

1 提取液:临用前将粉剂一倒入提取液中,溶液为悬浊液,使用前需摇匀。

产品简介:

PPO 主要存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是一种含铜的氧化酶,能使一元酚和二元酚氧化产生醌, 从而引起褐化,与果蔬加工、茶叶品质和组培等密切相关。

PPO 能够催化邻苯二酚产生醌,后者在 410nm 有特征光吸收。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

1. 收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率 200W,超声 3 秒,间隔 10 秒,重复 30 次);8000g 4℃离心 10 分钟,取上清,置冰上待测。

2. 称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10 分钟,取上清,置冰上待测。

3. 血清(浆):直接检测。

二、测定步骤

1 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 410nm,蒸馏水调零。

2 样本测定(在 EP 管中依次加入下列试剂)

试剂名称(μL

测定管

对照管

试剂一

600

600

试剂二

150

150

样本

150

 

煮沸的样本

 

150

37℃(哺乳动物) 25℃(其它物种)中准确水浴 10min 后,迅速放入沸水中加热 10min。冷却后,5000g,常温离心 10min,收集上清,410nm 处检测测定管和对照管吸光度,计算 ΔA=A 测定-A 对照。

注意:每个测定管需要设置一个对照管,可以在不同对照管中加入不同样本的粗酶液,然后集中进行 5min 沸水浴处理。

三、PPO 活性计算

          (1) 按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每分钟每 mg 组织蛋白在每mL 反应体系中使 410nm 处吸光值变化 0.01 定义为一个酶活力单位。PPO(U/mg prot)= ΔA÷0.01×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T =60×ΔA÷Cpr

(2) 按样本质量计算:

单位的定义:每分钟每 g 组织在每 mL 反应体系中使 410nm 处吸光值变化 0.01 定义为一个酶活力单位。PPO(U/g 质量)=ΔA÷0.01×V 反总÷(W÷V 样总×V 样)÷T =60×ΔA÷W

(3) 按细菌或细胞数量计算:

单位的定义:每分钟每 1 万个细菌或细胞在每 mL 反应体系中使 410nm 处吸光值变化 0.01 定义为一个酶活力单位。

PPO(U/104 cell)= ΔA÷0.01×V 反总÷(500÷V 样总×V 样)÷T =0.12×ΔA

V 反总:反应体系总体积,0.9mL;V 样:加入反应体系中样本体积,0.15mL;V 样总:加入提取液体积,1mL Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞数量,500 万;T:反应时间,10min。

注意事项:

不同样本的多酚氧化酶最佳的反应温度略有差别,可在 25-37℃之间进行调节。


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