上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测,Elisa代测,HPLC 检测,GC检测,GC-MS 检测,LC-MS检测,ICP-MS检测 、土壤、植物、动物,成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
货号:UPLC-MS-4537 | 规格:100T/48S | 微量法 |
货号:UPLC-MS-4536 | 规格:50T/24S | 可见分光光度法 |
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
提取液 |
液体 60 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
粉剂一 |
粉剂×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂一 |
液体 40 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂二 |
液体 10 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
溶液的配制:
1、 提取液:临用前将粉剂一倒入提取液中,溶液为悬浊液,使用前需摇匀。
PPO 主要存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是一种含铜的氧化酶,能使一元酚和二元酚氧化产生醌, 从而引起褐化,与果蔬加工、茶叶品质和组培等密切相关。
PPO 能够催化邻苯二酚产生醌,后者在 410nm 有特征光吸收。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 410nm,蒸馏水调零。
2、 样本测定(在 EP 管中依次加入下列试剂)
试剂名称(μL) |
测定管 |
对照管 |
试剂一 |
600 |
600 |
试剂二 |
150 |
150 |
样本 |
150 |
|
煮沸的样本 |
|
150 |
37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)中准确水浴 10min 后,迅速放入沸水中加热 10min。冷却后,5000g,常温离心 10min,收集上清,410nm 处检测测定管和对照管吸光度,计算 ΔA=A 测定-A 对照。
注意:每个测定管需要设置一个对照管,可以在不同对照管中加入不同样本的粗酶液,然后集中进行 5min 沸水浴处理。
单位的定义:每分钟每 mg 组织蛋白在每mL 反应体系中使 410nm 处吸光值变化 0.01 定义为一个酶活力单位。PPO(U/mg prot)= ΔA÷0.01×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T =60×ΔA÷Cpr
(2) 按样本质量计算:
单位的定义:每分钟每 g 组织在每 mL 反应体系中使 410nm 处吸光值变化 0.01 定义为一个酶活力单位。PPO(U/g 质量)=ΔA÷0.01×V 反总÷(W÷V 样总×V 样)÷T =60×ΔA÷W
(3) 按细菌或细胞数量计算:
单位的定义:每分钟每 1 万个细菌或细胞在每 mL 反应体系中使 410nm 处吸光值变化 0.01 定义为一个酶活力单位。
PPO(U/104 cell)= ΔA÷0.01×V 反总÷(500÷V 样总×V 样)÷T =0.12×ΔA
V 反总:反应体系总体积,0.9mL;V 样:加入反应体系中样本体积,0.15mL;V 样总:加入提取液体积,1mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞数量,500 万;T:反应时间,10min。
不同样本的多酚氧化酶最佳的反应温度略有差别,可在 25-37℃之间进行调节。
独立公正 方法科学 规范严谨 服务周到