动物组织中甲醛脱氢酶(FDH)活性检测试剂盒-动物组织中甲醛脱氢酶(FDH)试剂盒



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购

货号:UPLC-MS-5080 规格:100T/96S 微量法
货号:UPLC-MS-5079  规格:50T/48S 可见分光光度法

产品内容使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致有疑问请及时联系工作人员

试剂名称

规格

保存条件

提取液

液体 110 mL×1

4℃保存

试剂一

液体 15 mL×1

4℃保存

试剂二

粉剂×2

-20℃保存

试剂三

粉剂×2

4℃保存

试剂四

液体 2 mL×1

4℃保存

溶液的配制:

1 试剂二:临用前加入 0.25 mL 蒸馏水,充分混匀;用不完的试剂-20℃分装保存两周,避免反复冻融。(1瓶粉剂溶解后可做 100T,为了延长使用时间,此产品多给 1 瓶粉剂)

2 试剂二工作液:根据试验所需用量,按照试剂二(μL∶蒸馏水(μL)=1∶29 比例配成工作液,现配现用。试剂二工作液当天配制当天用完。

3 试剂三:临用前加入 0.6mL 蒸馏水,充分溶解;用不完的试剂 4℃分装保存两周。

产品说明

甲醛脱氢酶存在于绝大多数原核生物以及所有的真核生物中,是一种将甲醛进行转换的氧化还原酶。甲醛脱氢酶可催化甲醛和 NAD+产生 NADH,在 340nm 处的吸光值会增加,测定 340nm 处的吸光值变化,可计算得到甲醛脱氢酶的活性。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品

紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、恒温培养箱/水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 UV 板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

组织:按照动物组织质量(g):提取液体积(mL)=1∶5~10 的比例(建议称取 0.1 g 动物组织,加入 1 mL 提取液),冰浴匀浆,8000 g,4℃条件下离心 10 min;取上清(若上清不够澄清,建议重复上述离心步骤)置于冰上待测。

二、测定步骤

1 紫外分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上,调节波长至 340 nm,蒸馏水调零。

2 临用前将试剂一、试剂四置于 37℃预热 10 min。

3 在微量石英比色皿或96 孔UV 板中依次加入 20 μL 样本、110 μL 试剂一、50 μL 试剂二工作液、10 μL 试剂三、10 μL 试剂四,充分混匀后于 340nm 处测定 20s 时的吸光值 A1,迅速置于 37℃水浴或培养箱 5min(酶标仪有控温功能可将温度调至 37℃),拿出迅速擦干测定 5min20s 时的吸光值 A2。计算 ΔA=A2-A1。

三、动物组织中甲醛脱氢酶活性计算

A、按微量石英比色皿计算

1、按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白每分钟催化生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。 FDH酶活(U/mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V反总×109÷(V样×Cpr)÷T×F=321.54×ΔA÷Cpr×F

2、按样本质量计算:

单位的定义:每g组织每分钟催化生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。

FDH酶活(U/g 质量)=ΔA÷(ε×d)×V反总×109÷(V样×W÷V样总)÷T×F=321.54×ΔA÷W×F

ε:NADH 摩尔消光系数,6220 L/mmol/cm;d:比色皿光径,1 cm;V反总:反应体系总体积,2×10-4L;V样: 加入样本体积,0.02 mL;V样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W 样本质量,g;109:单位换算系数,1mol=109 nmol;F:稀释倍数。

B、按 96 孔板(UV 板)计算

将上述公式中 d=1 cm 变为 d=0.6 cm,代入公式进行计算即可。

注意事项

1、如果测定吸光值 A>1.5 ΔA>0.5,建议用提取液稀释样本后再测定,计算公式中乘以稀释倍数;如果测定吸光值较低,建议增加样本量后再进行测定。

2、试剂四有毒性,实验时请佩戴口罩手套等防护用具。


上一篇:多酚氧化酶(PPO)活性检测试剂盒-多酚氧化酶(PPO)试剂盒-上海液质
下一篇:淀粉脱分支酶(DBE)活性检测试剂盒-淀粉脱分支酶(DBE)试剂盒-上海液质

独立公正 方法科学 规范严谨 服务周到

咨询热线
400-998-2324
欢迎关注官方微信
版权所有:上海液质检测技术有限公司    网站备案号:沪ICP备2022005945号
400-998-2324
0.048012s