上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测,Elisa代测,HPLC 检测,GC检测,GC-MS 检测,LC-MS检测,ICP-MS检测 、土壤、植物、动物,成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
货号:UPLC-MS-4300 | 规格:100T/96S | 微量法 |
货号:UPLC-MS-4299 | 规格:50T/48S | 紫外分光光度法 |
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
提取液 |
液体 75 mL×2 瓶 |
2-8℃保存 |
试剂一 |
粉剂×1 瓶 |
常温保存 |
标准品 |
粉剂×1 支 |
2-8℃保存 |
溶液的配制:
1、标准品:10 mg 单宁酸。临用前加入 1.175 mL 提取液溶解为 5000 nmol/mL 的标准液,2-8℃保存两周。
单宁又称植物多酚,是一类广泛存在于植物体内的多元酚化合物。单宁可作为潜在的生物标记物;与蛋白质结合的能力又称为收敛性或涩性。其收敛性是多种生理活性的基础,如止血、抗肿瘤、抗衰老等生理活性,也是影响产品口感的因素之一。
根据光谱特性,单宁在275nm下有较强的紫外吸收,通过利用活性炭能够特异吸附单宁的性质来检测单宁含量。
最低检出限:0.13 nmol/mL
线性范围:0.39-18 nmol/mL
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔UV板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、30-50目筛、蒸 馏水。
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
将样本烘干至恒重,粉碎,过 30-50 目筛之后,称取约 0.05g,加入 1mL 提取液(封口膜封口防止液体溅出),于 70℃水浴,准确提取 30min,期间可摇晃数次。12000rpm,25℃,离心 10min,取上清,用提取液定容至 1mL, 待测。
序号 |
稀释前浓度(nmol/mL) |
标准液体积(µL) |
提取液体积(µL) |
稀释后浓度(nmol/mL) |
1 |
5000 |
100 |
900 |
500 |
2 |
500 |
100 |
1900 |
25 |
3 |
25 |
1000 |
1000 |
12.5 |
4 |
12.5 |
1000 |
1000 |
6.25 |
5 |
6.25 |
1000 |
1000 |
3.125 |
6 |
3.125 |
1000 |
1000 |
1.5625 |
7 |
1.5625 |
1000 |
1000 |
0.78125 |
备注:实验中每个标准管需 500µL 标准溶液。
4. 加样表:
试剂名称 |
测定管 |
对照管 |
标准管 |
空白管 |
试剂一 |
大约5-7mg |
- |
- |
大约5-7mg |
提取液 |
- |
- |
- |
0.5mL |
标准溶液 |
- |
- |
0.5mL |
- |
样本 |
0.5mL |
0.5mL |
- |
- |
充分混匀震荡 5min,13000g 室温离心 20min。取 200μL 上清液测定 275nm 下的吸光度,分别记为 A 测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管,计算ΔA 测定=A 对照管-A 测定管,A 标准=A 标准管-A 空白管。每个测定管需设一个对照管。标准曲线和空白管只需测 1-2 次。
根据标准管的浓度(y,nmol/mL)和吸光度ΔA标准(x,ΔA标准),建立标准曲线。根据标准曲线,将ΔA 测定(x,ΔA测定)带入公式计算样本浓度(y,nmol/mL)。
2. 单宁含量计算:
(1) 按蛋白浓度计算
单宁含量(nmol/mg prot)=y×V提取÷(V提取×Cpr) =y÷Cpr
(2) 按样本质量计算
单宁含量(nmol/g 质量)=y×V提取÷W =y÷W
Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;V提取:提取液体积,1mL。
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