单宁含量检测试剂盒-单宁检测试剂盒-上海液质



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购


货号:UPLC-MS-4300 规格:100T/96S 微量法
货号:UPLC-MS-4299 规格:50T/48S 紫外分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

提取液

液体 75 mL×2

2-8℃保存

试剂一

粉剂×1

常温保存

标准品

粉剂×1

2-8℃保存

溶液的配制:

1、标准品:10 mg 单宁酸。临用前加入 1.175 mL 提取液溶解为 5000 nmol/mL 的标准液,2-8℃保存两周。

产品说明:

单宁又称植物多酚,是一类广泛存在于植物体内的多元酚化合物。单宁可作为潜在的生物标记物;与蛋白质结合的能力又称为收敛性或涩性。其收敛性是多种生理活性的基础,如止血、抗肿瘤、抗衰老等生理活性,也是影响产品口感的因素之一。

根据光谱特性,单宁在275nm下有较强的紫外吸收,通过利用活性炭能够特异吸附单宁的性质来检测单宁含量。

技术指标:

最低检出限:0.13 nmol/mL

线性范围:0.39-18 nmol/mL

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔UV板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、30-50目筛、蒸   馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

将样本烘干至恒重,粉碎,过 30-50 目筛之后,称取约 0.05g,加入 1mL 提取液(封口膜封口防止液体溅出), 70℃水浴,准确提取 30min,期间可摇晃数次。12000rpm,25℃,离心 10min,取上清,用提取液定容至 1mL 待测。

二、测定步骤

1. 紫外分光光度计/酶标仪预热30min,波长调至275nm,紫外分光光度计提取液调零。

2. 标准液的稀释:将标准液用提取液稀释为25、12.5、6.25、3.125、1.5625、0.78125nmol/mL标准溶液。

3. 标准液稀释可参考下表:

序号

稀释前浓度nmol/mL

标准液体积(µL

提取液体积(µL

稀释后浓度nmol/mL

1

5000

100

900

500

2

500

100

1900

25

3

25

1000

1000

12.5

4

12.5

1000

1000

6.25

5

6.25

1000

1000

3.125

6

3.125

1000

1000

1.5625

7

1.5625

1000

1000

0.78125

备注:实验中每个标准管需 500µL 标准溶液。

4. 加样表:

试剂名称

测定管

对照管

标准管

空白管

试剂一

大约5-7mg

-

-

大约5-7mg

提取液

-

-

-

0.5mL

标准溶液

-

-

0.5mL

-

样本

0.5mL

0.5mL

-

-

充分混匀震荡 5min,13000g 室温离心 20min。取 200μL 上清液测定 275nm 下的吸光度,分别记为 A 测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管,计算ΔA 测定=A 对照管-A 测定管,A 标准=A 标准管-A 空白管。每个测定管需设一个对照管。标准曲线和空白管只需测 1-2 次。

三、单宁含量计算

          1. 标准曲线的绘制:

根据标准管的浓度(y,nmol/mL)和吸光度ΔA标准(x,ΔA标准),建立标准曲线。根据标准曲线,将ΔA      测定(x,ΔA测定)带入公式计算样本浓度(y,nmol/mL)。

2. 单宁含量计算:

    (1) 按蛋白浓度计算

单宁含量(nmol/mg prot)=y×V提取÷(V提取×Cpr) =y÷Cpr

(2) 按样本质量计算

单宁含量(nmol/g 质量)=y×V提取÷W =y÷W

Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g;V提取:提取液体积,1mL。

注意事项:

1. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。注意同步修改计算公式。

2. 按蛋白浓度计算时,由于提取液中含有破坏蛋白结构的成分,故需要重新提取蛋白进行测定。


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