超氧阴离子清除能力检测试剂盒-超氧阴离子清除能力试剂盒-上海液质



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购


货号:UPLC-MS-5054 规格:100T/96S 微量法
货号:UPLC-MS-5053 规格:50T/48S 可见分光光度法

产品内容:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

提取液

液体 110 mL×1

2-8℃保存

试剂一

液体 1.3mL×1

2-8℃保存

试剂二

粉剂×2

2-8℃保存

试剂三

液体 6 mL×1

2-8℃保存

试剂四

液体 6 mL×1

2-8℃保存

试剂五

液体 6 mL×1

2-8℃保存

溶液的配制:

1 试剂二:临用前每瓶加 5.34mL 蒸馏水充分溶解。2-8℃保存 4 周。

产品说明:

生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用,但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用,导致机体细胞和组织代谢异常,从而引起多种疾病。

AP-TEMED 系统产生超氧阴离子,与盐酸羟胺反应生成 NO2NO 与对氨基苯磺酰胺和α-萘胺的作用生成红色的偶氮化合物,在 530nm 处有特征吸收峰,样品对超氧阴离子的清除能力与 530nm 的吸光值呈负相关。 

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、恒温培养箱/水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/ 匀浆器,冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

1、组织样本:按照组织质量(g)︰提取液体积(mL) 1︰5~10 的比例(建议称取约 0.1 g 组织,加入 1 mL 提取液)进行冰浴匀浆,然后 10000 g,4℃,离心 10 min,取上清,置于冰上待测。

2、液体样本:直接检测。若有浑浊则离心后取上清待测。

3、细胞样本:收集细胞到离心管内,弃上清,按照每 500 万细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细胞(功率 200w 超声 3s,间隔 10s,重复 30 次),然后 10000g,4℃,离心 10min,取上清,置冰上待测。

二、测定步骤

1 分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上,调节波长至 530 nm,分光光度计蒸馏水调零。

2 操作表:

试剂名称(µL

空白管

测定管

试剂一

10

10

试剂二

40

40

充分混匀, 25℃反应 1min

      水

25

 

样品

 

25

试剂三

50

50

充分混匀, 37℃反应 30min

试剂四

50

50

试剂五

50

50

充分混匀, 37℃显色 20min,在 530nm 处测定空白管和测定管的吸光值,分别记为 A 空白和 A 测定。空白管只需测定 1-2 次。

三、超氧阴离子清除能力计算

超氧阴离子清除率(%)=(A 空白-A 测定)÷A 空白×100%

注意事项:

1. 样本制备好之后,立刻进行测定,请勿将样本进行长时间的低温保存,以免影响测定结果。


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