上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测,Elisa代测,HPLC 检测,GC检测,GC-MS 检测,LC-MS检测,ICP-MS检测 、土壤、植物、动物,成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
货号:UPLC-MS-4441
规格:100T/96S
微量法
货号:UPLC-MS-4440
规格:50T/48S
可见分光光度法
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
提取液 |
液体 50 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂一 |
液体 15 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂二 |
粉剂×2 瓶 |
4℃保存 |
标准品 |
粉剂×1 瓶 |
4℃保存 |
溶液的配制:
1.试剂二:用前一天,向试剂二中加 2 mL 蒸馏水充分溶解,再加磷酸 0.5 mL,混匀后盖紧(防止水分散失)沸水浴 2h;冷却后加 8 mL 蒸馏水,4℃可保存 2 周。(一瓶即可做 100T,为延长试剂盒使用时间,故多给一瓶)
2.标准品:10 mg 半胱氨酸。将标准品加入 4.13mL 蒸馏水,可得到 20μmol/mL 的标准液。4℃可以保存 4 周。
蛋白质含有三种含硫氨基酸:甲硫氨酸、胱氨酸和半胱氨酸(Cys)。其中,Cys 是唯一一种含有巯基的含硫氨基酸,从甲硫氨酸转化而来,并且可与胱氨酸互相转化。Cys 参与蛋白质二硫键的形成,经常是蛋白质活性中心的组成部分,还可以为其它生理生化反应提供巯基。此外,Cys 大量积聚在皮肤和粘膜表面,在角蛋白生成中维持重要的巯基酶的活性,并且补充巯基,以维持皮肤的正常代谢,调节表皮最下层的色素细胞生成的底层黑色素。具有美白、解毒、改善炎症和过敏性皮肤等作用。
Cys 还原磷钨酸生成钨蓝,在 600nm 处有吸收峰;通过测定 600nm 吸光度,计算 Cys 含量。
最低检出限:0.0066 μmol/mL
线性范围:0.03125-3 μmol/mL
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备仪器和用品:
低温离心机、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/匀浆器、磷酸和蒸馏水。
1、 液体样本中半胱氨酸提取:取 0.2mL 液体样本,加提取液 0.3mL,充分混匀,11000rpm 4℃离心 10min,取上清液待测。
2、 组织中半胱氨酸提取:称取约 0.2g 组织,加入提取液 0.5mL,冰上充分研磨,11000rpm 4℃离心 10 min,取上清液待测。
试剂名称(μL) |
测定管 |
标准管 |
空白管 |
样本 |
40 |
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标准品 |
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40 |
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蒸馏水 |
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40 |
试剂一 |
100 |
100 |
100 |
试剂二 |
60 |
60 |
60 |
混匀后室温静置 15 min,于 600nm 处测定吸光值。
1、 标准曲线的绘制:
以各标准溶液浓度为 x 轴,以∆A(A 标准管-A 空白管)为 y 轴做标准曲线,得到方程 y=kx+b。将(A 测定管-A 空白管)带入方程求 x 值。
2、 半胱氨酸含量计算:
(1) 按液体样本的体积计算
半胱氨酸含量(μmol/mL)=x×V 样总÷V 样 1= 2.5x
(2) 按样本质量计算
半胱氨酸含量(μmol/g 质量)= x×V 样 2÷(W×V 样 2÷V 样总)=0.5x÷W
V 样 1:提取体系中加入的样本体积,0.2mL;V 样 2:反应体系中加入的样本体积,0.04mL;V 样总:提取体系体积,0.5mL;W:样本质量,g。
如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
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