半胱氨酸(Cys)含量检测试剂盒-半胱氨酸(Cys)试剂盒-上海液质



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货号:UPLC-MS-4441 规格:100T/96S 微量法
货号:UPLC-MS-4440 规格:50T/48S 可见分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

提取液

液体 50 mL×1

4℃保存

试剂一

液体 15 mL×1

4℃保存

试剂二

粉剂×2

4℃保存

标准品

粉剂×1

4℃保存

溶液的配制:

1.试剂二:用前一天,向试剂二中加 2 mL 蒸馏水充分溶解,再加磷酸 0.5 mL,混匀后盖紧(防止水分散失)沸水浴 2h;冷却后加 8 mL 蒸馏水,4℃可保存 2 周。(一瓶即可做 100T,为延长试剂盒使用时间,故多给一瓶) 

2.标准品:10 mg 半胱氨酸。将标准品加入 4.13mL 蒸馏水,可得到 20μmol/mL 的标准液。4℃可以保存 4 周。

产品说明:

蛋白质含有三种含硫氨基酸:甲硫氨酸胱氨酸和半胱氨酸(Cys)。其中,Cys 是唯一一种含有巯基的含硫氨基酸,从甲硫氨酸转化而来,并且可与胱氨酸互相转化。Cys 参与蛋白质二硫键的形成,经常是蛋白质活性中心的组成部分,还可以为其它生理生化反应提供巯基。此外,Cys 大量积聚在皮肤和粘膜表面,在角蛋白生成中维持重要的巯基酶的活性,并且补充巯基,以维持皮肤的正常代谢,调节表皮最下层的色素细胞生成的底层黑色素。具有美白、解毒、改善炎症和过敏性皮肤等作用。

Cys 还原磷钨酸生成钨蓝,在 600nm 处有吸收峰;通过测定 600nm 吸光度,计算 Cys 含量。

技术指标:

最低检出限:0.0066 μmol/mL

线性范围:0.03125-3 μmol/mL

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备仪器和用品:

低温离心机、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/匀浆器、磷酸和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

1 液体样本中半胱氨酸提取:取 0.2mL 液体样本,加提取液 0.3mL,充分混匀,11000rpm 4℃离心 10min,取上清液待测。

2 组织中半胱氨酸提取:称取约 0.2g 组织,加入提取液 0.5mL,冰上充分研磨,11000rpm 4℃离心 10 min,取上清液待测。

二、测定步骤

1. 可见分光光度计/酶标仪预热 30min 以上,调节波长到 600nm,蒸馏水调零。

2. 标准液的配制:用蒸馏水稀释为 2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625μmol/mL 浓度的标准溶液。

3. 按下表加入各试剂

试剂名称(μL

测定管

标准管

空白管

样本

40

 

 

标准品

 

40

 

蒸馏水

 

 

40

试剂一

100

100

100

试剂二

60

60

60

混匀后室温静置 15 min,于 600nm 处测定吸光值。

三、半胱氨酸含量计算

1 标准曲线的绘制:

以各标准溶液浓度为 x 轴,以∆A(A 标准管-A 空白管) y 轴做标准曲线,得到方程 y=kx+b。将(A 测定管-A 空白管)带入方程求 x 值。

2 半胱氨酸含量计算:

(1) 按液体样本的体积计算

半胱氨酸含量(μmol/mL)=x×V 样总÷V 1= 2.5x

(2) 按样本质量计算

半胱氨酸含量(μmol/g 质量)= x×V 2÷(W×V 2÷V 样总)=0.5x÷W

V 1:提取体系中加入的样本体积,0.2mL;V 2:反应体系中加入的样本体积,0.04mL;V 样总:提取体系体积,0.5mL;W:样本质量,g。

注意事项:

如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。


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