上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测,Elisa代测,HPLC 检测,GC检测,GC-MS 检测,LC-MS检测,ICP-MS检测 、土壤、植物、动物,成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
货号:UPLC-MS-4495 | 规格:100T/96S | 微量法 |
货号:UPLC-MS-4494 | 规格:50T/48S | 可见分光光度法 |
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
提取液 |
液体 50 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂一 |
粉剂×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂二 |
液体 12.5 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂三 |
液体 44.5 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
溶液的配制:
1、 工作液(在试剂一瓶中配制):临用前配制,把试剂二倒入试剂一瓶中,充分溶解(室温过低时可以 40℃水浴促进溶解);然后把试剂三倒入试剂一瓶中,混匀后室温保存。
γ-GT是γ-谷氨酰循环中的关键酶,催化GSH降解。γ-GT催化GSH或者其他γ-谷氨酰基化合物上的γ-谷氨酰基转移到受体。也可以催化GSH和其他γ-谷氨酰基化合物的水解,产生谷氨酸盐,在细胞外谷胱甘肽新陈代谢中起了重要的作用。
γ-GT催化谷氨酰对硝基苯胺中γ-谷氨酰基转移给N-甘氨酰甘氨酸,生成对硝基苯胺,在405nm有特征光吸收; 通过测定405nm光吸收增加速率,来计算γ-GT酶活性。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
2、组织:称取约 0.1g 样本,加提取液 1.0 mL 充分研磨,于 4℃,10000rpm 离心 15min,取上清液待测。
3、血清(浆):直接检测。
1、 分光光度计预热30min以上,调节波长至405nm,蒸馏水调零。
2、 试剂二置于25℃(一般物种)或者37℃(哺乳动物)水浴中预热30min以上(保证无沉淀)。
3、 样本测定:
加入试剂(μL) |
空白管 |
测定管 |
蒸馏水 |
100 |
- |
上清液/血清 |
- |
100 |
工作液 |
900 |
900 |
混匀后于 405nm 测定 10s 时的吸光度,吹打混匀后测量 130s 时的吸光度,记为 A1 和 A2。计算 ΔA 测定管=A测 2-测 A1,ΔA 空白管=A 空 2- A 空 1,计算 ΔA=ΔA 测定管-ΔA 空白管。
1、 按样本蛋白浓度计算:
活性单位定义:25℃或者37℃中,每毫克蛋白每分钟催化产生1μmol对硝基苯胺为一个活性单位。
γ-GT(U/mg prot)=ΔA÷(ε×d)×106×V反总÷(Cpr×V样)÷T=0.506×ΔA÷Cpr
2、 按样本质量计算:
活性单位定义:25℃或者37℃中,每克组织每分钟催化产生1μmol对硝基苯胺为一个活性单位。
γ-GT(U/g 质量)=ΔA÷(ε×d)×106×V反总÷(W÷V提取×V样)÷T=0.506×ΔA÷W
3、 按血清(浆)体积计算:
活性单位定义:25℃或者37℃中,每毫升血清每分钟催化产生1μmol对硝基苯胺为一个活性单位。
γ-GT(U/mL)=ΔA÷(ε×d)×106×V反总÷V样÷T=0.506×ΔA
4、 按细菌或细胞数量计算:
单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1μmol对硝基苯胺为一个活性单位。
γ-GT(U/104 cell)=ΔA÷(ε×d)×106×V反总÷(500×V样÷V提取) ÷T=0.001×ΔA
V样:加入样本体积,0.1mL;V提取:加入提取液体积:1mL;T:反应时间,2min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL; W:样本质量,g;500:细菌或细胞数量,500万细胞;ε:对硝基苯胺消光系数,9870L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm; V反总:反应体系总体积,0.001L;106:单位换算系数,1mol=106μmol。
培养细胞中γ-GT活性测定时,细胞中γ-GT的提取时可加试剂一后研磨或超声波处理,不能用细胞裂解液处理细胞(防止因为蛋白质变性导致酶失活)。
独立公正 方法科学 规范严谨 服务周到