γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)活性检测试剂盒-γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)试剂盒-上海液质



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购


货号:UPLC-MS-4495 规格:100T/96S 微量法
货号:UPLC-MS-4494 规格:50T/48S 可见分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

提取液

液体 50 mL×1

4℃保存

试剂一

粉剂×1

4℃保存

试剂二

液体 12.5 mL×1

4℃保存

试剂三

液体 44.5 mL×1

4℃保存

溶液的配制:

1 工作液(在试剂一瓶中配制):临用前配制,把试剂二倒入试剂一瓶中,充分溶解(室温过低时可以 40℃水浴促进溶解);然后把试剂三倒入试剂一瓶中,混匀后室温保存。

产品说明:

γ-GT是γ-谷氨酰循环中的关键酶,催化GSH降解。γ-GT催化GSH或者其他γ-谷氨酰基化合物上的γ-谷氨酰基转移到受体。也可以催化GSH和其他γ-谷氨酰基化合物的水解,产生谷氨酸盐,在细胞外谷胱甘肽新陈代谢中起了重要的作用。

γ-GT催化谷氨酰对硝基苯胺中γ-谷氨酰基转移给N-甘氨酰甘氨酸,生成对硝基苯胺,在405nm有特征光吸收; 通过测定405nm光吸收增加速率,来计算γ-GT酶活性。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):提取液体积(mL) 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20% 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);10000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

2、组织:称取约 0.1g 样本,加提取液 1.0 mL 充分研磨,于 4℃,10000rpm 离心 15min,取上清液待测。

3、血清(浆):直接检测。

二、测定步骤

1 分光光度计预热30min以上,调节波长至405nm,蒸馏水调零。

2 试剂二置于25℃(一般物种)或者37℃(哺乳动物)水浴中预热30min以上(保证无沉淀)。

3 样本测定:

加入试剂(μL

空白管

测定管

蒸馏水

100

-

上清液/血清

-

100

工作液

900

900

混匀后于 405nm 测定 10s 时的吸光度,吹打混匀后测量 130s 时的吸光度,记为 A1 A2。计算 ΔA 测定管=A 2- A1,ΔA 空白管=A 2- A 1,计算 ΔA=ΔA 测定管-ΔA 空白管。

三、γ-GT活性计算

1 按样本蛋白浓度计算:

活性单位定义:25℃或者37℃中,每毫克蛋白每分钟催化产生1μmol对硝基苯胺为一个活性单位。

γ-GT(U/mg prot)=ΔA÷(ε×d)×106×V反总÷(Cpr×V样)÷T=0.506×ΔA÷Cpr

 2 按样本质量计算:

活性单位定义:25℃或者37℃中,每克组织每分钟催化产生1μmol对硝基苯胺为一个活性单位。

γ-GT(U/g 质量)=ΔA÷(ε×d)×106×V反总÷(W÷V提取×V样)÷T=0.506×ΔA÷W

3 按血清(浆)体积计算:

活性单位定义:25℃或者37℃中,每毫升血清每分钟催化产生1μmol对硝基苯胺为一个活性单位。

γ-GT(U/mL)=ΔA÷(ε×d)×106×V反总÷V样÷T=0.506×ΔA

4 按细菌或细胞数量计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1μmol对硝基苯胺为一个活性单位。

γ-GT(U/104 cell)=ΔA÷(ε×d)×106×V反总÷(500×V样÷V提取) ÷T=0.001×ΔA

V样:加入样本体积,0.1mL;V提取:加入提取液体积:1mL;T:反应时间,2min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL W:样本质量,g;500:细菌或细胞数量,500万细胞;ε:对硝基苯胺消光系数,9870L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm V反总:反应体系总体积,0.001L;106:单位换算系数,1mol=106μmol。

注意事项:

培养细胞中γ-GT活性测定时,细胞中γ-GT的提取时可加试剂一后研磨或超声波处理,不能用细胞裂解液处理细胞(防止因为蛋白质变性导致酶失活)。


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