上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测,Elisa代测,HPLC 检测,GC检测,GC-MS 检测,LC-MS检测,ICP-MS检测 、土壤、植物、动物,成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
货号:UPLC-MS-4609 | 规格:100T/48S | 微量法 |
货号:UPLC-MS-4608 | 规格:50T/24S | 可见分光光度法 |
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
试剂一 |
粉剂×2 瓶 |
4℃保存 |
试剂二 |
液体 30mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂三 |
粉剂×2 瓶 |
4℃保存 |
试剂四 |
粉剂×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂五 |
液体 11mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂六 |
粉剂×2 瓶 |
4℃保存 |
试剂七 |
液体 12mL×1 瓶 |
4℃保存 |
标准品 |
液体 1mL×1 支 |
4℃保存 |
溶液的配制:
1、 试剂一:临用前取一瓶加入 60mL 蒸馏水,充分溶解;用不完的试剂 4℃保存可保存 4 周;
2、 试剂三:临用前取一瓶加入 6mL 蒸馏水,充分溶解;用不完的试剂-20℃分装保存 2 周,避免反复冻融;
3、 试剂四:临用前加入 3mL 蒸馏水,充分溶解;用不完的试剂 4℃可保存 4 周;
4、 试剂六:临用前取一瓶加入 6mL 蒸馏水,充分溶解;用不完的试剂 4℃密封保存可保存 4 周。
一、粗酶液提取(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、除去细胞核和线粒体等:称约 0.5g 组织,加入 4℃预冷的 1mL 试剂一,冰上充分研磨,10 000g,4℃离心 30min,取上清液,转移到超速离心管中。
2、粗制微粒体:4℃,100 000g,离心 60min,弃上清液。
3、除血红蛋白等杂质:向步骤 2 的沉淀中加 1mL 试剂一,盖紧后充分震荡溶解,100 000g 离心 30min,弃上清液。
4、最终微粒体:向步骤 3 的沉淀中加 0.5mL 试剂二,盖紧后充分震荡溶解,即粗酶液,置于冰上待测。
1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 630nm,蒸馏水调零。
2、 临用前根据实验用量取出部分试剂二在 37℃水浴中预热 30min。
3、 试剂五置于冰浴冷却30min。
4、 在 EP 管加入下列试剂:
试剂名称(μL) |
对照管 |
测定管 |
标准管 |
粗酶液 |
50 |
50 |
- |
试剂三 |
100 |
100 |
- |
试剂四 |
- |
50 |
- |
蒸馏水 |
50 |
- |
- |
涡旋混匀,置于 37℃恒温培养箱/水浴锅中准确水浴 30min; |
- |
||
试剂五 |
100 |
100 |
- |
涡旋混匀,置于冰浴中 5min;11000rpm,4℃离心 10min;取上清液待测; |
- |
||
上清液 |
100 |
100 |
- |
标准溶液 |
- |
- |
100 |
试剂六 |
100 |
100 |
100 |
试剂七 |
100 |
100 |
100 |
涡旋混匀,室温静置 30min;取出 200μL 至微量玻璃比色皿/96 孔板中,测定 630nm 下吸光度,分别记为 A 对照管、A 测定管、A 标准管; |
活性单位定义:37℃条件下,每克组织每分钟催化产生 1nmol 4-氨基酚为 1 个酶活单位。AH 活性(nmol/min/g 质量) = C 标×V 标×(A 测定管-A 对照管)÷A 标准管×F÷(V 样×W)÷T= 2×(A 测定管-A 对照管)÷A 标准管÷W
C 标:10μmol/L;V 标:100μL=0.1mL;F:稀释倍数,V 反总÷V 上清液=300μL÷100μL=3;Cpr:粗酶液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定,建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒;V 样:加入粗酶液体积, 50μL=0.05mL; W:样本质量,g;T:催化反应时间,30min。
1、如果测定吸光值 A>1.5 或 ΔA>1,建议稀释样本后再测定,计算公式中乘以稀释倍数。
2、如果测定吸光值较低或接近空白 OD 值,建议增加样本量后再进行测定,注意同步修改计算公式。
3、粗酶液提取后需在当日完成测定。
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