上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
| 货号：UPLC-MS-4172 | 规格：100T/48S | 微量法 |
| 货号：UPLC-MS-4171 | 规格：50T/24S | 可见分光光度法 |
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试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
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试剂一 |
液体 35 mL×1 瓶 |
常温保存 |
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试剂二 |
液体 10 mL×2 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂三 |
粉剂×2 支 |
2-8℃保存 |
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标准品 |
粉剂×1 支 |
2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 试剂一：若有黄色晶体析出，需加热溶解后再用；
2、 试剂二：临用前取取 1 支试剂三加入到 1 瓶试剂二中，置于常温水中并加热至煮沸，期间不断搅拌粉剂至溶解，用不完的试剂 2-8℃保存 4 周；
3、 标准品：10 mg 无水葡萄糖。临用前加入 1 mL 蒸馏水配制成 10 mg/mL 的标准溶液，2-8℃保存两周。
产品说明：淀粉酶负责水解淀粉，主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。β-淀粉酶(EC 3.2.1.2) 从淀粉的非还原端切开α-1,4糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖。还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质。α-淀粉酶不耐酸，β-淀粉酶不耐热。根据上述特性，钝化其中之一，就可测出另一种淀粉酶的活力。
注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、离心机、可调式移液器、96孔板/微量玻璃比色皿、研钵/匀浆器和蒸馏水。操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
称取约 0.1g 样本，加入 0.8mL 蒸馏水，研磨匀浆；将匀浆倒入离心管中，提取液在室温下放置提取 15min， 每 5min 振荡 1 次，使其充分提取；6000g，常温离心 10min，取上清液加蒸馏水定容至 10mL，摇匀，即淀粉酶原液。吸取上述淀粉酶原液 1mL，加入 4mL 蒸馏水，摇匀，即为淀粉酶稀释液，用于（α+β）淀粉酶总活力的测定。
二、测定步骤
1. 可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到540nm，分光光度计蒸馏水调零。
2. 标准液的稀释：将10mg/mL葡萄糖标准液用蒸馏水稀释为0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.0078 mg/mL的标准溶液。
3. 标准液稀释可参考下表：
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序号 |
稀释前浓度（mg/mL） |
标准液体积（µL） |
蒸馏水体积（µL） |
稀释后浓度（mg/mL） |
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1 |
10 |
50 |
950 |
0.5 |
|
2 |
0.5 |
200 |
200 |
0.25 |
|
3 |
0.25 |
200 |
200 |
0.125 |
|
4 |
0.125 |
200 |
200 |
0.0625 |
|
5 |
0.0625 |
200 |
200 |
0.03125 |
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6 |
0.03125 |
200 |
200 |
0.015625 |
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7 |
0.015625 |
200 |
200 |
0.0078 |
备注：实验中每个标准管需 75µL 标准溶液。
单位定义：每g组织每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。
α-淀粉酶活性(U/g 质量)=x1×V 样÷(W×V 样÷V 样总)÷T=2×x 1÷W
（2） 按照蛋白质含量计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。
α-淀粉酶活性(U/mg prot)=x1×V 样÷（V样×Cpr ）÷T=0.2×x 1÷Cpr
3. 总淀粉酶活性计算：
（1）按照样本质量计算
单位定义：每g组织每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。总淀粉酶活性 (U/g 质量)=5×x 2×V 样÷(W×V 样÷V 样总) ÷T=10×x 2÷W
（2）按照蛋白质含量计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。总淀粉酶活性(U/mg prot)=5×x 2×V 样÷（V样×Cpr ）÷T=x 2 ÷Cpr
4. β-淀粉酶活性计算：
（1） 按照样本质量计算
单位定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。
β-淀粉酶活性（U/g 质量）=淀粉酶总活性-α-淀粉酶活性=（10×x 2÷W ）-（2×x 1÷W ）=（10×x 2-2×x 1）÷W
（2） 按照蛋白质含量计算
单位定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。
β-淀粉酶活性（U/mg prot）=淀粉酶总活性-α-淀粉酶活性=（x2÷Cpr ）-（0.2×x 1÷Cpr ）
5：总淀粉酶稀释倍数；V样：加入反应体系中样本体积，0.075mL；V样总：提取液总体积，10mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，5min。
注意事项：
测定的吸光值大于1.5时，可以对样本进行适当稀释后测定。若吸光值过小，可以浓缩淀粉酶稀释液或者淀粉酶原液。
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