溶液的配制：

1、 试剂一：临用前加入 20mL 试剂三，置于常温水中并加热至煮沸，期间不断搅拌粉剂至溶解，用不完的试剂 2-8℃保存 8 周；

2、 标准品：10 mg 淀粉标准品。临用前加 10 mL 试剂三，置沸水浴中振荡溶解，配成 1 mg/mL 淀粉标准液。2-8℃保存四周。

淀粉酶负责水解淀粉，主要包括 α-淀粉酶和 β-淀粉酶。β-淀粉酶(EC 3.2.1.2) 从淀粉的非还原端切开 α-1,4 糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖。

碘可以与未被淀粉酶水解的淀粉结合，生成在 570nm 下有特征吸收峰的复合物，其深浅可计算出淀粉酶的活力单位。α-AL 耐酸，β-AL 不耐热。根据上述特性，钝化其中之一，就可测得另一种活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

操作步骤：

 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、组织：称取约 0.1g 样本，加 1mL 蒸馏水匀浆；匀浆后在室温下放置提取 15min，每隔 5min 振荡 1 次，使其充分提取；6000g，常温离心 10min，吸取上清液即为淀粉酶原液。

2、液体：直接检测。（若有浑浊则离心后进行测定） 

二、测定步骤

1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至570nm，蒸馏水调零。

2、 将淀粉标准液用蒸馏水稀释为0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0.0015625mg/mL的标准溶液。

实验中每个标准管需250µL 标准溶液。

单位定义：每mL液体每分钟消耗1mg淀粉定义为1个酶活性单位。

α-淀粉酶活性(U/mL)= x1×V 样÷V 样÷T=0. 2×x 1

V样：加入反应体系中样本体积，0.25mL；V样总：样本总体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W： 样本质量，g；T：反应时间，5min。

3、总淀粉酶活性的计算

（1） 按照样本质量计算

单位定义：每g组织每分钟消耗1mg 淀粉定义为1个酶活力单位。总淀粉酶活性(U/g 质量)=x2×V 样÷(W×V 样÷V 样总)÷T=0. 2×x 2÷W

    （2） 按照蛋白质浓度计算

单位定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1mg淀粉定义为1个酶活性单位。总淀粉酶活性(U/mg prot)= x2×V 样÷（V样×Cpr ）÷T=0. 2×x 2÷Cpr

   （3） 按液体体积计算

单位定义：每mL液体每分钟消耗1mg淀粉定义为1个酶活性单位。总淀粉酶活性(U/mL)= x2×V 样÷V 样÷T=0. 2×x 2

V样：加入反应体系中样本体积，0.25mL；V样总：样本总体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W： 样本质量，g；T：反应时间，5min。

4、β-淀粉酶活性的计算

（1） 按照样本质量计算

单位定义：每g组织每分钟消耗1mg 淀粉定义为1个酶活力单位。

β-淀粉酶活性(U/g 质量)=淀粉酶总活性-α-淀粉酶活性=0.2×x 2÷W -0.2×x 1÷W

    （2） 按照蛋白质浓度计算

单位定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1mg淀粉定义为1个酶活性单位。

β-淀粉酶活性(U/mg prot)=淀粉酶总活性-α-淀粉酶活性=0.2×x 2÷Cpr -0.2×x 1÷Cpr

   （3） 按液体体积计算

单位定义：每mL液体每分钟消耗1mg淀粉定义为1个酶活性单位。

β-淀粉酶活性(U/mL)=淀粉酶总活性-α-淀粉酶活性=0.2×x 2-0.2×x 1

吸光值大于1.5或者ΔA大于0.8时，可以对样本进行适当稀释后测定。