α-葡萄糖苷酶(α-GC)活性检测试剂盒-α-葡萄糖苷酶(α-GC)试剂盒-上海液质



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购


货号:UPLC-MS-4221 规格:100T/48S 微量法
货号:UPLC-MS-4220 规格:50T/24S 可见分光光度法

产品内容使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致有疑问请及时联系工作人员


试剂名称

规格

保存条件

提取液

液体 50 mL×1

2-8℃保存

试剂一

粉剂×2

-20℃保存

试剂二

液体 25 mL×1

2-8℃保存

试剂三

液体 80 mL×1

2-8℃保存

标准品

液体 1 mL×1

2-8℃保存

溶液的配制:

1、试剂一:临用前取 1 瓶加入 10 mL 蒸馏水,充分溶解备用;用不完的试剂-20℃保存 4 周,避免反复冻融。

2、标准品:5 μmol/mL 的对硝基苯酚溶液。

产品说明:

α-GC(EC 3.2.1.20)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化水解芳基或烃基与糖基之间的α-糖苷键生成葡萄糖,不仅与细胞壁的松弛或加固有关,而且与细胞识别和一些信号分子产生密切相关。

α-GC分解对-硝基苯-α-D吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚,后者在400nm有最大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算α-GC活性。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。


需自备的仪器和用品

可见分光光度计、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、超声破碎仪、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/ 匀浆器、冰和蒸馏水。 


操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

1、细菌或培养细胞的处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每 1000 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率 200W,超声 3 秒,间隔 10 秒,重复 30 次),15000g,4℃,离心 20min,取上清,置冰上待测。

2、组织的处理:称取约 0.2g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆;15000g,4℃,离心 20min,取上清,置冰上待测。

3、液体样本:直接检测。若溶液有浑浊需离心后取上清进行测定。

二、测定步骤

1 分光光度计预热30min以上,调节波长400nm,蒸馏水调零。

2 标准溶液的稀释:将 5μmol/mL 的标准液用蒸馏水稀释成 100、50、25、12.5、6.25、0 nmol/mL 标准溶液待测。

3 标准液稀释可参考下表:

序号

稀释前浓度nmol/mL

标准液体积(µL

蒸馏水体积(µL

稀释后浓度nmol/mL

1

5000

100

400

1000

2

1000

200

1800

100

3

100

1000

1000

50

4

50

1000

1000

25

5

25

1000

1000

12.5

6

12.5

1000

1000

6.25

7

6.25

0

1000

0(空白管)

备注:实验中每个标准管需 500µL 标准溶液。

4 加样表

试剂名称(μL

测定管

对照管

标准管

试剂一

400

 

 

试剂二

500

500

 

样本

100

100

 

充分混匀,放入37℃水浴锅/恒温培养箱中准确反应30min后,立即放入沸水浴中煮沸5min(盖紧,以防止水分散失),流水冷却后充分混匀(以保证浓度不变)

试剂一

 

400

 

充分混匀,8000g4℃,离心5min,取上清液待测

上清液

500

500

 

标准液

 

 

500

试剂三

1000

1000

1000

充分混匀,室温静置 2min 后,于 400nm 处测定吸光值 A,分别记为A 测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管。计算 ΔA 测定=A 测定管-A 对照管。ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。每个测定管需设一个对照管。标准曲线和空白管只需测 1-2 次。

三、α-GC活力计算

1、标准曲线建立:

根据标准管的浓度(x,nmol/mL)和吸光度(y,ΔA标准),建立标准曲线。根据标准曲线,将ΔA(y,ΔA 测定)代入公式计算样本产物浓度x(nmol/mL)。

2、α-GC活力计算


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