货号:UPLC-MS-4221 | 规格:100T/48S | 微量法 |
货号:UPLC-MS-4220 | 规格:50T/24S | 可见分光光度法 |
产品内容:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
提取液 |
液体 50 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
试剂一 |
粉剂×2 瓶 |
-20℃保存 |
试剂二 |
液体 25 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
试剂三 |
液体 80 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
标准品 |
液体 1 mL×1 支 |
2-8℃保存 |
溶液的配制:
1、试剂一:临用前取 1 瓶加入 10 mL 蒸馏水,充分溶解备用;用不完的试剂-20℃保存 4 周,避免反复冻融。
2、标准品:5 μmol/mL 的对硝基苯酚溶液。
产品说明:α-GC(EC 3.2.1.20)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化水解芳基或烃基与糖基之间的α-糖苷键生成葡萄糖,不仅与细胞壁的松弛或加固有关,而且与细胞识别和一些信号分子产生密切相关。
α-GC分解对-硝基苯-α-D吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚,后者在400nm有最大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算α-GC活性。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、超声破碎仪、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/ 匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、细菌或培养细胞的处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每 1000 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率 200W,超声 3 秒,间隔 10 秒,重复 30 次),15000g,4℃,离心 20min,取上清,置冰上待测。
2、组织的处理:称取约 0.2g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆;15000g,4℃,离心 20min,取上清,置冰上待测。
3、液体样本:直接检测。若溶液有浑浊需离心后取上清进行测定。
二、测定步骤
1、 分光光度计预热30min以上,调节波长400nm,蒸馏水调零。
2、 标准溶液的稀释:将 5μmol/mL 的标准液用蒸馏水稀释成 100、50、25、12.5、6.25、0 nmol/mL 标准溶液待测。
3、 标准液稀释可参考下表:
序号 |
稀释前浓度(nmol/mL) |
标准液体积(µL) |
蒸馏水体积(µL) |
稀释后浓度(nmol/mL) |
1 |
5000 |
100 |
400 |
1000 |
2 |
1000 |
200 |
1800 |
100 |
3 |
100 |
1000 |
1000 |
50 |
4 |
50 |
1000 |
1000 |
25 |
5 |
25 |
1000 |
1000 |
12.5 |
6 |
12.5 |
1000 |
1000 |
6.25 |
7 |
6.25 |
0 |
1000 |
0(空白管) |
备注:实验中每个标准管需 500µL 标准溶液。
4、 加样表
试剂名称(μL) |
测定管 |
对照管 |
标准管 |
|
试剂一 |
400 |
|
|
|
试剂二 |
500 |
500 |
|
|
样本 |
100 |
100 |
|
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充分混匀,放入37℃水浴锅/恒温培养箱中准确反应30min后,立即放入沸水浴中煮沸5min(盖紧,以防止水分散失),流水冷却后充分混匀(以保证浓度不变) |
||||
试剂一 |
|
400 |
|
|
充分混匀,8000g,4℃,离心5min,取上清液待测 |
||||
上清液 |
500 |
500 |
|
|
标准液 |
|
|
500 |
|
试剂三 |
1000 |
1000 |
1000 |
|
充分混匀,室温静置 2min 后,于 400nm 处测定吸光值 A,分别记为A 测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管。计算 ΔA 测定=A 测定管-A 对照管。ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。每个测定管需设一个对照管。标准曲线和空白管只需测 1-2 次。 |
1、标准曲线建立:
根据标准管的浓度(x,nmol/mL)和吸光度(y,ΔA标准),建立标准曲线。根据标准曲线,将ΔA(y,ΔA 测定)代入公式计算样本产物浓度x(nmol/mL)。
2、α-GC活力计算
独立公正 方法科学 规范严谨 服务周到