| 货号：UPLC-MS-6004 | 规格：100T/48S | 微量法 |
| 货号：UPLC-MS-6003 | 规格：50T/24S | 可见分光光度法 |
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
|
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
|
试剂一 |
粉剂×1 瓶 |
2-8℃保存 |
|
试剂二 |
液体 10mL×1 支 |
2-8℃保存 |
|
试剂三 |
液体 30 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
|
标准品 |
粉剂×1 瓶 |
2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 试剂一：临用前加入 12.5mL 试剂三，置于常温水中并加热至煮沸，期间不断搅拌粉剂至溶解，用不完的试剂 2-8℃保存 8 周；
2、 标准品：10 mg 淀粉标准品。临用前加 10 mL 试剂三，置沸水浴中振荡溶解，配成 1 mg/mL 淀粉标准液，2-8℃保存四周。
产品说明：淀粉酶负责水解淀粉，包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键， 生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉的粘度降低，因此又称为液化酶。
α-淀粉酶催化淀粉分子中的α-1,4糖苷键水解，产生葡萄糖、麦芽糖以及糊精等，碘可以与未被水解的淀粉结合，生成在570nm下有特征吸收峰的复合物，其深浅可计算出淀粉酶的活力单位。α-AL耐热，但是β-淀粉酶可在70℃钝化15min。因此粗酶液经过70℃钝化15min，就只有α-AL能够催化淀粉水解。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、组织：称取约 0.1g 样本，加 1mL 蒸馏水匀浆；匀浆后在室温下放置提取 15min，每隔 5min 振荡 1 次，使其充分提取；6000g，室温离心 10min，吸取上清液即为淀粉酶原液。
2、液体：直接检测。（若有浑浊则离心后进行测定）
二、测定步骤
1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至570nm，蒸馏水调零。
2、 将淀粉标准液用蒸馏水稀释为0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0.0015625mg/mL的标准溶液。
|
序号 |
稀释前浓度（mg/mL） |
标准液体积（µL） |
蒸馏水体积（µL） |
稀释后浓度（mg/mL） |
|
1 |
1 |
200 |
800 |
0.2 |
|
2 |
0.2 |
500 |
500 |
0.1 |
|
3 |
0.1 |
500 |
500 |
0.05 |
|
4 |
0.05 |
500 |
500 |
0.025 |
|
5 |
0.025 |
500 |
500 |
0.0125 |
|
6 |
0.0125 |
500 |
500 |
0.00625 |
|
7 |
0.00625 |
500 |
500 |
0.003125 |
|
8 |
0.003125 |
500 |
500 |
0.0015625 |
实验中每个标准管需250µL 标准溶液。
3、 按操作表依次加入各试剂：
|
试剂（μL） |
测定管 |
对照管 |
空白管 |
标准管 |
标准空白管 |
|
α-淀粉酶原液 |
250 |
250 |
- |
- |
- |
|
蒸馏水 |
- |
- |
250 |
- |
250 |
|
标准溶液 |
- |
- |
- |
250 |
- |
|
70℃水浴15min左右，冷却 |
|||||
|
试剂一 |
250 |
- |
250 |
- |
- |
|
蒸馏水 |
- |
250 |
- |
250 |
250 |
|
在40℃恒温水浴中准确保温10min |
|||||
|
试剂二 |
125 |
125 |
125 |
125 |
125 |
|
蒸馏水α-淀粉酶（α-AL）活性检测试剂盒-α-淀粉酶（α-AL）试剂盒-上海液质
独立公正 方法科学 规范严谨 服务周到 | |||||
