上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购

货号：UPLC-MS-4413	规格：100T/96S	微量法
货号：UPLC-MS-4412	规格：50T/48S	紫外分光光度法

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂二：临用前加入 500 μL 试剂一，充分溶解待用；可分装后-20℃保存，避免反复冻融；

2、 试剂三：临用前加入 2 mL 试剂一，充分溶解待用；可分装后-20℃保存，避免反复冻融；

3、 试剂四：临用前加入 0.5 mL 试剂一，充分溶解待用；可分装后-20℃保存，避免反复冻融；

4、 试剂五：临用前加入 0.5 mL 试剂一，充分溶解待用；可分装后-20℃保存，避免反复冻融；

5、 提取液的配制：按提取液一︰提取液二=990︰10（V︰V）的比例配制，根据样本量现配现用，禁止将提取液二一次性全部加入提取液一混匀分装待用。

产品说明：

ATP-柠檬酸裂解酶（ATP-citrate lyase，ACL）是催化柠檬酸生成乙酰辅酶A的关键胞质酶，其催化产生的乙酰辅酶A是合成脂肪酸与胆固醇等脂类物质的主要原料，并可参与相关重要蛋白的修饰作用，是体内能源物质代谢的枢纽性物质。

在ATP和辅酶A存在的情况下，ACL能将柠檬酸催化裂解为乙酰辅酶A、草酰乙酸、ADP和磷酸盐,，苹果酸脱氢酶进一步催化草酰乙酸和NADH生成苹果酸和NAD+，导致340nm处光吸收下降。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、天平、台式低温离心机、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、水浴锅、冰盒。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、组织：按照质量（g）︰提取液体积(mL)为 1︰5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆。于 4℃，8000g 离心 10min，取上清，置于冰上待测。

2、细胞或细菌：按照细胞或细菌数量（104 个）︰提取液体积（mL）为 500~1000︰1 的比例（建议 500 万细胞或细菌加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞或细菌（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min），于 4℃， 8000g 离心 10min，取上清，置于冰上待测。

3、血清（浆）或其他液体：直接检测。

二、测定步骤

1、 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2、 将试剂一置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min。

3、 操作表 (在微量石英比色皿/96 孔 UV 板中依次加入下列试剂)  ：

注意：如果样本量大，可按试剂一︰试剂二︰试剂三︰试剂四︰试剂五=161︰4︰20︰4︰1 的比例配制成工作液使用，工作液应根据样本量现配现用。

三、ACL活性计算

A、按微量石英比色皿计算：

1. 按样本蛋白浓度计算

单位定义：每 mg 蛋白每分钟消耗 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位

ACL 活性（U/mg prot）=[ΔA×V 反总×109÷（ε×d）]÷(V 样×Cpr) ÷T=1607.7×ΔA÷Cpr

2. 按样本质量计算

单位定义：每 g 组织每分钟消耗 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

ACL 活性（U/g 质量）=[ΔA×V 反总×109÷（ε×d）]÷(W×V 样÷V 样总)÷T=1607.7×ΔA÷W

3. 按照细胞数量计算

单位定义：每 1 万个细胞或细菌每分钟消耗 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。ACL 活性（U/104 cell）=[ΔA×V 反总×109÷（ε×d）] ÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=3.215×ΔA

4. 按液体体积计算

单位定义：每 mL 液体每分钟消耗 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。ACL（U/mL）=[ΔA×V 反总×109÷（ε×d）]÷V 样÷T=1607.7×ΔA

V 反总：反应总体积，2×10-4L；109：单位换算系数，1mol=109nmol；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L/mol/cm；