上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购

货号：UPLC-MS-4577	规格：100T/96S	微量法
货号：UPLC-MS-4576	规格：50T/48S	可见分光光度法

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

溶液的配制：

1. 提取液低温条件下，可能有结晶析出，放于 60℃水浴加热溶解即可，不影响使用。

2. 试剂二：临用前加入 7 mL 蒸馏水充分溶解，可加热促进溶解；

3. 试剂四：临用前取 1 支加入 0.2mL 蒸馏水溶解，用不完的试剂-20℃分装保存 2 周，避免反复冻融；

4. 试剂五：临用前加入 3.2 mL 蒸馏水充分溶解，用不完的试剂-20℃分装保存 4 周，避免反复冻融；

5. 试剂六：临用前取 1 支加入 0.25 mL 蒸馏水备用，用不完的试剂-20℃分装保存 2 周，避免反复冻融；

6. 标准品：5 mg ATP。临用前加入 0.826 mL 蒸馏水配成 10 μmol/mL 的 ATP 标准溶液，用不完的试剂-20℃分装保存 4 周，避免反复冻融；

7. 工作液的配制：临用前请按试剂二(mL)：试剂三(mL)：试剂四(mL)：试剂五(mL)：试剂六(mL)=1：1：0.1：0.4：0.1 的比例配制（2.6mL，约 10T 的量），现配现用。

产品说明：

ATP 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是生物能量通货，能荷是描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定 ATP 含量并且计算能荷，能够反映能量代谢状态。

HK 催化葡萄糖和 ATP 合成 6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化 6-磷酸葡萄糖脱氢生成 NADPH， NADPH 在 340nm 有特征吸收峰，NADPH 和 ATP 含量成正比，以此反应 ATP 含量。

技术指标：

最低检出限：0.0023 μmol/mL

线性范围：0.0390625-2.5 μmol/mL

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计、水浴锅/恒温培养箱、低温离心机、可调式移液枪、1mL 石英比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水、冰和氯仿。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、 血清（浆）中 ATP  的提取：按照血清（浆）体积（mL）：提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议取约 0.1m血清（浆），加入 1mL 提取液），充分震荡，10000g，4℃离心 10min；取上清液至另一 EP 管中，加入 500μL的氯仿充分震荡混匀，10000g 4℃离心 3min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。

2、 组织中 ATP 的提取：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心 10min，取上清至另一 EP 管中，加入 500μL 的氯仿充分震荡混匀，10000g 4℃离心 3min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。

3、 细胞或细菌中 ATP 的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎（冰浴，功率 20%或 200W，超声 2s，停 1s，总时间 1min），10000g 4 ℃离心 10min；取上清液至另一 EP  管中，加入 500μL的氯仿充分震荡混匀，10000g 4℃离心 3min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。注：以上提取过程严格控制在冰浴条件下进行。

二、测定步骤

1、 紫外分光光度计预热 30min 以上，调节波长到 340nm，蒸馏水调零。

2、 标准溶液的稀释：取 100μL 10μmol/mLATP 标准溶液，加入 1.5mL 蒸馏水，充分混匀，配制成 0.625μmol/mL标准液使用，现用现配。（实验中每管需要 100μL，为减小实验误差，故配制大体积。）

3、 样本测定：

三、ATP 含量计算

1、 血清（浆）中 ATP 含量计算

ATP 含量(μmol/mL) =ΔA 测定÷（ΔA 标准÷C 标准）×（V 提取+V 血清（浆））÷V 血清（浆）=6.875×ΔA 测定÷ΔA 标准

2、 组织、细菌或细胞中 ATP 含量计算

           (1) 按样本质量计算

ATP 含量（μmol/g 质量）= ΔA 测定÷（ΔA 标准÷C 标准）×V 提取÷W=0.625×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W

(2) 按细菌或细胞数量计算