上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
| 货号：UPLC-MS-4575 | 规格：100T/48S | 微量法 |
| 货号：UPLC-MS-4574 | 规格：50T/24S | 可见分光光度法 |
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试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
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试剂一 |
液体 60 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂二 |
液体 4 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂三 |
粉剂×2 支 |
-20℃保存 |
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试剂四 |
液体 2 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂五 |
液体 3 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂六 |
粉剂×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂七 |
粉剂×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂八 |
液体 5 mL×1 瓶 |
常温保存 |
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标准品 |
液体 1 mL×1 支 |
2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 试剂三：临用前取 1 支加入 1 mL 蒸馏水充分混匀待用；现用现配。用不完的试剂-20℃分装保存一周。
2、 试剂六：临用时加入 5 mL 蒸馏水，溶解后 2-8℃保存两周。
3、 试剂七：临用时加入 5 mL 蒸馏水，溶解后 2-8℃保存两周。
4、 标准品：10mmol/L 标准磷贮备液。将标准品 20 倍稀释，即取 0.1 mL 标准品加 1.9 mL 蒸馏水充分混匀， 配成 0.5 μmol/mL 标准磷应用液，现用现配。
5、 定磷剂的配制：按H2O：试剂六：试剂七：试剂八=2:1:1:1 比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色。若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂根据样本量现用现配。
注意：配试剂最好用新的烧杯、玻璃棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
Ca++Mg++-ATP酶广泛分布于植物、动物、微生物和细胞中，可催化ATP水解生成ADP和无机磷。根据Ca++Mg++-ATP酶分解ATP生成ADP及无机磷，通过测定无机磷的量来确定ATP酶活性高低。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅/恒温培养箱、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/ 匀浆器、冰和蒸馏水。
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一， 超声波破碎细菌或细胞（功率 200w，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
组织：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。血清（浆）样本：直接检测。
1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至660nm，可见分光光度计需用蒸馏水调零。
2、 酶促反应（在EP管中加入下列试剂）
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试剂名称 |
对照管 |
测定管 |
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试剂一（μL） |
65 |
45 |
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试剂二（μL） |
40 |
40 |
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试剂三（μL） |
20 |
20 |
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试剂四（μL） |
- |
20 |
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样本（μL） |
- |
100 |
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混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）准确水浴10min |
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试剂五（μL） |
25 |
25 |
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样本（μL） |
100 |
- |
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混匀，4000g，常温离心10min，取上清液 |
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3、 定磷（在EP管或96孔板中加入下列试剂）
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试剂名称 |
空白管 |
标准管 |
对照管 |
测定管 |
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0.5μmol/mL标准磷应用液（μL） |
- |
20 |
- |
- |
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上清液（μL） |
- |
- |
20 |
20 |
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蒸馏水（μL） |
20 |
- |
- |
- |
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定磷试剂（μL） |
200 |
200 |
200 |
200 |
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混匀，40℃水浴10min，冷却至室温，在 660nm处，记录各管吸光值。计算ΔA测定=A测定管-A 对照管，ΔA标准= A标准管-A空白管。每个测定管需设一个对照管，标准管和空白管只需测1-2次。 |
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1、血清（浆）Ca++Mg++-ATPase活力的计算：
定义：规定每小时每毫升血清（浆）中Ca++Mg++-ATP酶分解ATP产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位。
Ca++Mg++-ATP酶活力(U/mL)=C标准管×ΔA测定÷ΔA标准×V 总÷V 样÷T=7.5×ΔA测定÷ΔA标准
2、组织、细菌或细胞中Ca++Mg++-ATPase活力的计算：
（1） 按蛋白浓度计算：
定义：规定每小时每毫克组织蛋白中Ca++Mg++-ATP酶分解ATP产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位。
Ca++Mg++-ATP酶活力(U/mg prot)=C标准管×ΔA测定÷ΔA标准×V 总÷（Cpr×V 样）÷T=7.5× ΔA测定÷ΔA标准÷Cpr
（2） 按样本质量计算：
定义：规定每小时每克组织中Ca++Mg++-ATP酶分解ATP产生1μmol无机磷的量为一个酶活力单位
独立公正 方法科学 规范严谨 服务周到
