上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购

货号：UPLC-MS-4391	规格：100T/96S	微量法
货号：UPLC-MS-4390	规格：50T/48S	可见分光光度法

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂一：临用前加入 16 mL 蒸馏水，充分溶解；

2. 试剂二：临用前加入 2 mL 蒸馏水，充分溶解。

产品说明：

L-半乳糖途径是合成AsA的主要途径。Gal LDH位于线粒体内膜，负责催化植物体内AsA生物合成的最后一步， 也是该途径的关键酶之一，对植物体内AsA含量的积累起着至关重要的作用。Gal LDH催化L-半乳糖内酯还原氧化型细胞色素C(Cyt c)，还原型Cyt c在550nm有吸收峰；测定还原型Cyt c增加速率，来计算Gal LDH活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液器、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

称取约 0.1g 样本，加提取液 1mL，冰上充分研磨，13000g 4℃离心 10min，取上清液置冰上待测。

二、测定步骤

1、 分光光度计/酶标仪预热30 min，调节波长到550nm，蒸馏水调零。

2、 按样本数取出一定量的试剂一在25℃水浴锅中预热30 min以上，其余的分装保存(-20℃)。

3、 空白管：依次在微量比色皿/96孔板中加入20μL蒸馏水、160μL预热的试剂一和20μL试剂二，迅速混匀后于550nm比色，记录10s和130s的吸光值，分别为A1，A2，ΔA空白管=A2-A1。

4、 测定管：依次在微量比色皿/96孔板中加入20μL上清液、160μL预热的试剂一和20μL试剂二，迅速混匀后于550nm比色，记录10s和130s的吸光值，分别为A3，A4，ΔA测定管=A4-A3。

三、Gal LDH 活性计算

a. 使用微量比色皿测定的计算公式如下】

（1） 按蛋白浓度计算：

Gal LDH活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟还原1μmol Cyt c为1个酶活单位。