Na+K+-ATP 酶活性检测试剂盒-Na+K+-ATP 酶试剂盒-上海液质



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购


货号:UPLC-MS-4573   规格:100T/48S 微量法
货号:UPLC-MS-4572 规格:50T/24S 可见分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

试剂一

液体 60 mL×1

2-8℃保存

试剂二

液体 4 mL×1

2-8℃保存

试剂三

粉剂×2

-20℃保存

试剂四

液体 2 mL×1

2-8℃保存

试剂五

液体 3mL×1

2-8℃保存

试剂六

粉剂×1

2-8℃保存

试剂七

粉剂×1

2-8℃保存

试剂八

液体 5 mL×1

常温保存

标准品

液体 1 mL×1

2-8℃保存

溶液的配制:

1 试剂三:临用前取 1 支加 1 mL 蒸馏水溶解,现用现配。用不完的试剂-20℃分装保存一周。

2 试剂六:用时加入 5 mL 蒸馏水,溶解后 4℃保存两周。

3 试剂七:用时加入 5 mL 蒸馏水,溶解后 4℃保存两周。

4 标准品:10 μmol/mL 标准磷贮备液。将标准品 20 倍稀释,即取 0.1 mL 标准品加 1.9 mL 蒸馏水充分混匀, 配成 0.5 μmol/mL 标准磷应用液,现用现配。

5 定磷剂的配制:按 H2O:试剂六:试剂七:试剂八=2:1:1:1 的比例配制,配好的定磷剂应为浅黄色。若无色则试剂失效,若是蓝色则为磷污染,定磷剂根据实验用量现用现配。

注意:配试剂最好用新的烧杯、玻璃棒和玻璃移液器,也可以用一次性塑料器皿,避免磷污染。

产品说明:

Na+K+- ATP 酶广泛分布于植物、动物、微生物和细胞中,可催化 ATP 水解生成 ADP 和无机磷。Na+K+-ATP 酶分解 ATP 生成 ADP 及无机磷,通过测定无机磷的量来确定 ATP 酶活性。


注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:


可见分光光度计/酶标仪、水浴锅/恒温培养箱、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/ 匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

1、细菌、细胞或组织样本的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一, 超声波破碎细菌或细胞(功率 200w,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

组织:称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样本:直接检测。

二、测定步骤

1、可见分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 660nm,可见分光光度计需用蒸馏水调零。

2、酶促反应(在 EP 管中加入下列试剂)

试剂名称

对照管

测定管

试剂一(μL

65

45

试剂二(μL

40

40

试剂三(μL

20

20

试剂四(μL

-

20

样本 μL

-

100

混匀,37℃(哺乳动物)或 25℃(其他物种)准确水浴 10min

试剂五(μL

25

25

样本 μL

100

-

混匀,4000g,常温离心 10min,取上清液

3、定磷

试剂名称

空白管

标准管

对照管

测定管

0.5μmol/mL 标准磷应用液(μL

-

20

-

-

上清液(μL

-

-

20

20

蒸馏水(μL

20

-

-

-

定磷试剂(μL

200

200

200

200

涡旋混匀,置于 40℃水浴锅中准确水浴 10min,在 660nm 处,记录各管吸光值。分别记为 A 空白、A

标准、A 对照、A 测定。每个测定管需设一个对照管,标准管和空白管只需测 1-2 次。

三、Na+K+-ATP 酶活计算

1、血清(浆)Na+K+-ATPase 活力的计算:

定义:规定每小时每毫升血清(浆)中 Na+K+- ATP 酶分解 ATP 产生 1μmoL 无机磷的量为一个


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