上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购

货号：UPLC-MS-4353	规格：100T/48S	微量法
货号：UPLC-MS-4352	规格：50T/24S	可见分光光度法

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂三：用时加入 3 mL 双蒸水，充分溶解，可分装保存，-20℃保存两周，禁止反复冻融；临用前取出一支稀释 100 倍使用。

2、 试剂四：用时加入 1 mL 双蒸水，充分溶解，4℃保存；

3、 试剂五：用时加入 2 mL 双蒸水，充分溶解，4℃保存；

4、 试剂六：用时加入 2 mL 双蒸水，充分溶解，4℃保存；

5、 试剂七：用时加入 2 mL 双蒸水，充分溶解，4℃避光保存；

6、 试剂八：液体置于试剂瓶内 EP 管中。临用前加入 0.986 mL 蒸馏水充分溶解，可分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

7、 试剂十：自备 95%乙醇；

8、 标准品：加入 1.9 mL 蒸馏水，即得 2 μmol/mL NADP 标品。临用前稀释 100 倍得 20 nmol/mL NADP 标准溶液备用。

产品说明：NADK（EC 2.7.1.23）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是目前所发现的生物体内唯一能够催化 NAD+磷酸化生成 NADP+的酶，可催化 NAD(H)以 ATP 或无机多聚磷酸[poly(P)]作为磷酰基供体进行磷酸化反应，生成 NADP(H)。因此，NAD 激酶在合成 NADP(H)以及调节 NAD(H)与 NADP(H)的平衡上具有重要作用。NADK 催化 NAD+磷酸化，生成 NADP+；NADP+可被 6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原为 NADPH；NADPH 通过 PMS的递氢作用，还原氧化型噻唑蓝（MTT），通过其在 570nm 的吸光值大小可反映出 NADK 活性的大小。注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、无水乙醇、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

        1、 细菌、细胞或组织样本的制备：细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，弃上清，按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率 20%，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

组织：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样本：直接检测。

二、测定步骤

1、 可见分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 570nm，95%乙醇调零。

2、 标准品的配制：按下表混合试剂三和标准品配制标准品