上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购

货号：UPLC-MS-4435	规格：100T/96S	微量法
货号：UPLC-MS-4434	规格：50T/48S	可见分光光度法

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂三：临用前加入 1.33 mL 无水乙醇，盖紧后充分混匀，再加入 18.67 mL 蒸馏水混匀，避光保存。

2、 试剂四：临用前加 2 mL 蒸馏水，充分溶解。

3、 标准品：10 mg 半胱氨酸，临用前加入 8.26 mL 蒸馏水，得到 10 μmol/mL 的半胱氨酸标准溶液备用。

产品说明：

动物肝脏、肾脏是氨基酸代谢的主要器官，故尿中氨基酸的变化最能反应肝、肾的生理状态。另外，氨基酸还能反应灼伤、伤寒等方面情况。植物体内氨基酸含量对研究植物在不同条件下及不同生长发育时期氮代谢变化、植物对氮素的吸收、运输、同化及营养状况等有重要意义。

氨基酸的α-氨基可与水合茚三酮反应，产生蓝紫色化合物，在570nm有特征吸收峰；通过测定570nm吸光度， 来计算氨基酸含量。

技术指标：

最低检出限：0.45 μmol/mL

线性范围：0.5-18 μmol/mL

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、无水乙醇、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

组织样本：称取约 0.1g 组织，加试剂一 1mL，室温下充分研磨，转移到 1.5mL EP 管中，盖紧后（防止水分散失）置于沸水浴提取 15min；自来水冷却后，10000rpm，4℃离心 10min，取上清液，待测。

细菌或细胞样本：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一， 超声波破碎细菌或细胞（功率 20%，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；10000rpm，4℃离心 10min，取上清液，待测。

液体：吸取 0.5mL 液体加入 0.5mL 试剂一，盖紧后（防止水分散失）置于沸水浴提取 15 min；自来水冷却后， 10000rpm，4℃离心 10min，取上清液，待测。

二、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 570nm，蒸馏水调零。

2. 操作表：（在 EP 管中进行）

混匀后盖紧瓶盖（防止水分散失），置于沸水浴中保温 15min，冷却后反复颠倒 EP 管数次，8000rpm 离心 5min 后取上清，于 570nm 测定吸光值，分别记为A 测定管、A 标准管、A 空白管，并计算 ΔA 测定管=A 测定管-A 空白管，ΔA 标准管=A 标准管-A 空白管，显色后务必在 30min 内测完。

三、氨基酸含量计算

1. 按样本质量计算

氨基酸含量（μmol/g 质量）=（C标准品×V 标准品×ΔA测定管÷ΔA标准管）÷（W÷V 样总×V样= 10×ΔA测定管÷ΔA标准管 ÷W

2. 按蛋白浓度计算

氨基酸含量（μmol/mg prot ）=（C标准品×V 标准品×ΔA测定管÷ΔA标准管）÷（Cpr×V 样）=10×ΔA测定管÷ΔA标准管÷Cpr

3. 按细菌或细胞数量计算

氨基酸含量 (μmol/104 cell) =（C标准品×V 标准品×ΔA测定管÷ΔA标准管）÷（500×V 样÷V 样总）=0.02×ΔA测定管÷ΔA标准管

4. 按液体体积计算

氨基酸含量（μmol/mL）=（C标准品×ΔA测定管÷ΔA标准管）×2= 20×ΔA测定管÷ΔA标准管

C标准品：标准品浓度，10μmol/mL；V标准品：反应体系中加入标准品体积，0.01mL；W：样本质量，g；V 样：反应体系中加入样本体积，0.01mL；V样总：样本总体积，1mL；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；500： 细菌或细胞总数，500万个；2：提取液体时的稀释倍数，（V液体+V试剂一）/V液体=2。

四、注意事项：

1、 试剂盒中试剂三和试剂四均需临用前配制，且避光保存。

2、 为保证实验结果的准确性，需先取 1-2 个样做预实验。