将上述试剂按顺序加入 1mL 石英比色皿中，加样本的同时开始计时，在 340nm 波长下记录 20 秒时的初始吸光度 A1；迅速将比色皿连同反应液一起放入 37℃水浴中，准确反应 2 分钟；迅速取出比色皿并擦干，记录 2 分 20 秒时的吸光度 A2。计算 ΔA=A2-A1。

三、ICDHc 活力单位的计算

1、血清（浆）ICDHc 活力的计算

单位的定义：每 mL 血清（浆）在反应体系中每分钟生成 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。ICDHc（U/mL）=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样本÷T=1608×ΔA

2、组织中 ICDHc 活力的计算

（1） 按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟生成 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。ICDHc（U/mg prot）=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样本×Cpr)÷T=1608×ΔA÷Cpr

（2） 按样本质量计算：

单位的定义：每 g 组织在反应体系中每分钟生成 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。ICDHc（U/g 质量）=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W÷V 提取×V 样本)÷T=1608×ΔA÷W

3、细菌或培养细胞中 ICDHc 活力的计算

（1） 按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟生成 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。ICDHc（U/mg prot）=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样本×Cpr)÷T=1608×ΔA÷Cpr

（2） 按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每 1 万个细菌或细胞在反应体系中每分钟生成 1nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。ICDHc（U/104 Cell）=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样本×500)÷T=3.2×ΔA

V 反总：反应总体积，0.001L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×103L/moL/cm；d：石英比色皿光径，1cm；V 样本：加入样本体积，0.05mL；V 提取：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T： 反应时间，2min；500：细菌或细胞密度，500 万/mL。

注意事项：

1、若 A2-A1 大于 0.5，需将酶液用提取液稀释，使 A2-A1 小于 0.5，可提高检测灵敏度。若初始值 A1 大于 0.5 可尝试将酶液用提取液稀释。

2、实验时，试剂二、试剂三和样本在冰上放置，以免变性和失活；工作液 37℃水浴放置。

3、比色皿中反应液的温度必须保持 37℃，取小烧杯一只装入一定量的 37℃蒸馏水，将此烧杯放入 37℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。

4、最好两个人同时做此实验，一个人比色，一个人计时，以保证实验结果的准确性。