苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性检测试剂盒--苯丙氨酸解氨酶试剂盒



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货号:UPLC-MS-4457 规格:100T/96S 微量法
货号:UPLC-MS-4456 规格:50T/48S 紫外分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

提取液

液体 110 mL×1

4℃保存

试剂一

液体 15 mL×1

4℃保存

试剂二

粉剂×2

4℃保存

试剂三

液体 1 mL×1

4℃保存

溶液的配制:

1 试剂二:临用前取 1 瓶加入 2.5 mL 蒸馏水充分溶解待用;现配现用,4℃可保存 2 周。

产品说明:

PAL(EC4. 3 1 5)广泛存在于各种植物和少数微生物中,是植物体内苯丙烷类代谢的关键酶和限速酶,在动物体内尚未发现。与一些重要的次生物质如木质素、类黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切相关,在植物正常生长发育、抗病、抗逆反应中起重要作用。

PAL 催化 L-苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸和氨,反式肉桂酸在 290nm 处有最大吸收值,通过测定吸光值升高速率计算 PAL 活性。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 UV 板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10 分钟,取上清,置冰上待测。

二、测定步骤

1 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 290nm,蒸馏水调零。

2 操作表:(在 EP 管或 96 孔板中按顺序加入下列试剂)

 

试剂名称(μL

测定管

空白管

样本

5

 

试剂一

145

150

试剂二

40

40


混匀,30℃  准确反应 30min

试剂三

10

10

混匀,静置 10min 后,290nm 处记录测定管吸光值 A1 和空白管吸光值 A2,ΔA=A1-A2。(空白管只需做 1-2 次)

三、PAL 活性计算

a、用微量石英比色皿测定的计算公式如下

(1) 按蛋白浓度计算

单位的定义:每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中每分钟使 290nm 下吸光值变化 0.1 定义为一个酶活性单位。PAL(U/mg prot)=ΔA×V 反总÷0.1÷(Cpr×V 样)÷T =13.33×ΔA÷Cpr

(2) 按按样本质量计算

单位的定义:每 g 组织在每 mL 反应体系中分钟使 290nm 下吸光值变化 0.1 定义为一个酶活性单位。PAL(U/g 质量)=ΔA×V 反总÷0.1÷(V 样÷V 提取×W)÷T =13.33×ΔA÷W

V 样:加入样本体积,5µL=0.005mL;V 提取:加入提取液体积,1mL;V 反总:反应总体积,200µL=0.2mL;T 反应时间,30min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。

b、用 96 孔板测定的计算公式如下

(1) 按蛋白浓度计算

单位的定义:每 mg 组织蛋白在每mL 反应体系中每分钟使 290nm 下吸光值变化 0.05 定义为一个酶活性单位。PAL(U/mg prot)=ΔA×V 反总÷0.05÷(Cpr×V 样)÷T =26.67×ΔA÷Cpr

(2) 按按样本质量计算

单位的定义:每 g 组织在每 mL 反应体系中每分钟使 290nm 下吸光值变化 0.05 定义为一个酶活性单位。PAL(U/g 质量)=ΔA×V 反总÷0.05÷(V 样÷V 提取×W)÷T =26.67×ΔA÷W

V 样:加入样本体积,5µL=0.005mL;V 提取:加入提取液体积,1mL;V 反总:反应总体积,200µL=0.2mL;T 反应时间,30min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。


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