草酸含量检测试剂盒-植物试剂盒-草酸试剂盒



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货号:UPLC-MS-4314 规格:100T/96S 微量法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

试剂一

粉剂×1

4℃保存

试剂二

液体 20 mL×1

4℃保存

试剂三

液体 1.5 mL×1

4℃保存

试剂四

粉剂×1

4℃保存

标准品

粉剂×1

4℃保存

溶液的配制:

1 试剂一:临用前加入 3mL 蒸馏水溶解后待用;

2 标准品:临用前加入 792µL 蒸馏水配制成 100 µmol/mL 草酸标准溶液;

产品说明:

草酸是一种二元羧酸,广泛存在于植物界中,且在不同领域有着不同的作用:在医药、印染、塑料等工业生产中,草酸可用作制药原料、络合剂漂白剂沉淀剂以及还原剂等;从食品角度看,长期食用草酸含量高的蔬菜, 容易引发关节炎、低血钙、膀胱结石和肾结石等疾病,而被认为是矿物元素的拮抗物。

Fe3+ pH 2 的条件下可以与磺基水杨酸生成紫色络合物,在 510 nm 处有特征吸收峰。草酸及草酸根可以使 Fe3+与磺基水杨酸的紫色络合物颜色变浅,且 Fe3+与磺基水杨酸络合物的吸光度随着草酸量的增加而降低,据此可由降低的吸光值计算出样本中草酸的含量。

技术指标:

最低检出限:0.1601 μmol/mL

线性范围:0.1875-18 μmol/mL

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/ 匀浆器、冰和蒸馏水、EP管。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

组织:按照质量(g):蒸馏水体积(mL) 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1 g,加入 1 mL 蒸馏水)充分匀浆, 然后加入少许试剂四( 3-5mg),震荡混匀后置于 75℃水浴锅脱色 30 min,期间摇晃 2-3 次,脱色后常温 3000r/min离心 15 min,取上清置于冰上待测(若组织沉淀与试剂四不能一次性离心去除时,建议将上清多离心几次;若一次脱色不完全时,建议重复脱色至溶液呈无色或略呈乳白色)。

二、测定步驟

1 分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上,调节波长至 510 nm,蒸馏水调零。

2 100 µmol/mL 的草酸标准液用蒸馏水稀释为 18、15、12、6、3、1.5、0.75、0.375 µmol/mL 的标准溶液备用。

3 操作表 ( 1.5 mL 离心管/96 孔板中操作) :

试剂名称(µL

空白管

测定管

标准管

试剂一

20

20

20

试剂二

150

150

150

试剂三

10

10

10

蒸馏水

20

-

-

样本

-

20

-

标准溶液

-

-

20

混匀,室温静置 20 min

于微量玻璃比色皿/96 孔板测定 510 nm 处吸光值 A,分别记为 A 空白管、A 测定管、A 标准管。计算 ΔA=A 空白管-A 测定管,ΔA 标准=A 空白管-A 标准管。同一批检测样本需测 1-2 个空白管(标准管只需检测 1-2 次)。

注意:如果检测样本量大,可以根据样本所需按照试剂一:试剂二:试剂三=2:15:1(v:v:v)的比例配制成工作液现配现用,加样体系为 180 µL 工作液,20 µL 样本(蒸馏水或标准溶液)。

三、草酸含量计算

1 标准曲线的绘制:

以各个标准溶液的浓度为 x 轴,其对应的 ΔA 标准为 y 轴,绘制标准曲线,得到标准方程 y= kx+b,将 ΔA 带入方程得到 x(µmol/mL)。

2 草酸含量的计算:

草酸含量(mg/g 质量)= x×V 提取×M×10-3÷W=0.09x÷W

V 提取:加入的蒸馏水体积,1mL;W:样本质量,g;M:草酸分子质量 90.04;10-3:单位换算系数,1µg=10-3 mg。

四、注意事项:

1. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。

2.如将试剂一、试剂二与试剂三配成工作液使用时,按照配制比例根据样本量所需现配现用,不得一次性配完待用。


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