货号:UPLC-MS-4314 | 规格:100T/96S | 微量法 |
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
试剂一 |
粉剂×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂二 |
液体 20 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
试剂三 |
液体 1.5 mL×1 支 |
4℃保存 |
试剂四 |
粉剂×1 瓶 |
4℃保存 |
标准品 |
粉剂×1 支 |
4℃保存 |
溶液的配制:
1、 试剂一:临用前加入 3mL 蒸馏水溶解后待用;
2、 标准品:临用前加入 792µL 蒸馏水配制成 100 µmol/mL 草酸标准溶液;
草酸是一种二元羧酸,广泛存在于植物界中,且在不同领域有着不同的作用:在医药、印染、塑料等工业生产中,草酸可用作制药原料、络合剂、漂白剂、沉淀剂以及还原剂等;从食品角度看,长期食用草酸含量高的蔬菜, 容易引发关节炎、低血钙、膀胱结石和肾结石等疾病,而被认为是矿物元素的拮抗物。
Fe3+在 pH 为 2 的条件下可以与磺基水杨酸生成紫色络合物,在 510 nm 处有特征吸收峰。草酸及草酸根可以使 Fe3+与磺基水杨酸的紫色络合物颜色变浅,且 Fe3+与磺基水杨酸络合物的吸光度随着草酸量的增加而降低,据此可由降低的吸光值计算出样本中草酸的含量。
最低检出限:0.1601 μmol/mL
线性范围:0.1875-18 μmol/mL
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/ 匀浆器、冰和蒸馏水、EP管。
组织:按照质量(g):蒸馏水体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1 g,加入 1 mL 蒸馏水)充分匀浆, 然后加入少许试剂四(约 3-5mg),震荡混匀后置于 75℃水浴锅脱色 30 min,期间摇晃 2-3 次,脱色后常温 3000r/min离心 15 min,取上清置于冰上待测(若组织沉淀与试剂四不能一次性离心去除时,建议将上清多离心几次;若一次脱色不完全时,建议重复脱色至溶液呈无色或略呈乳白色)。
1、 分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上,调节波长至 510 nm,蒸馏水调零。
2、 将 100 µmol/mL 的草酸标准液用蒸馏水稀释为 18、15、12、6、3、1.5、0.75、0.375 µmol/mL 的标准溶液备用。
3、 操作表 (在 1.5 mL 离心管/96 孔板中操作) :
试剂名称(µL) |
空白管 |
测定管 |
标准管 |
试剂一 |
20 |
20 |
20 |
试剂二 |
150 |
150 |
150 |
试剂三 |
10 |
10 |
10 |
蒸馏水 |
20 |
- |
- |
样本 |
- |
20 |
- |
标准溶液 |
- |
- |
20 |
混匀,室温静置 20 min |
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于微量玻璃比色皿/96 孔板测定 510 nm 处吸光值 A,分别记为 A 空白管、A 测定管、A 标准管。计算 ΔA=A 空白管-A 测定管,ΔA 标准=A 空白管-A 标准管。同一批检测样本需测 1-2 个空白管(标准管只需检测 1-2 次)。 |
注意:如果检测样本量大,可以根据样本所需按照试剂一:试剂二:试剂三=2:15:1(v:v:v)的比例配制成工作液现配现用,加样体系为 180 µL 工作液,20 µL 样本(蒸馏水或标准溶液)。
1、 标准曲线的绘制:
以各个标准溶液的浓度为 x 轴,其对应的 ΔA 标准为 y 轴,绘制标准曲线,得到标准方程 y= kx+b,将 ΔA 带入方程得到 x(µmol/mL)。
2、 草酸含量的计算:
草酸含量(mg/g 质量)= x×V 提取×M×10-3÷W=0.09x÷W
V 提取:加入的蒸馏水体积,1mL;W:样本质量,g;M:草酸分子质量 90.04;10-3:单位换算系数,1µg=10-3 mg。
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