二胺氧化酶(DAO)活性检测试剂盒-植物试剂盒-二胺氧化酶试剂盒



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购


货号:UPLC-MS-4561 规格:100T/48S  微量法
货号:UPLC-MS-4560 规格:50T/24S  可见分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

提取液

液体 60 mL×1

4℃保存

试剂一

液体 0.6 mL×1

4℃保存

试剂二

粉剂×1

4℃保存

试剂三

液体 1.5 mL×1

4℃保存

溶液的配制:

1 试剂二:液体置于试剂瓶内玻璃瓶中。临用前加入 6 mL 蒸馏水溶解,4℃可保存 1 个月。

产品说明:

DAO (EC1.4.3.6)广泛存在于动物(肠粘膜、肺、肝脏、肾脏等)、植物和微生物中。催化多胺氧化为醛,其活性与核酸和蛋白合成密切相关,能够反映肠道机械屏障的完整性和受损伤程度。

DAO 催化尸胺产生醛和过氧化氢,外源添加过量的辣根过氧化物酶,催化过氧化氢氧化邻联茴香胺生成有色物质,在 500nm 处有特征吸收峰,通过测定该波长吸光度增加速率,计算 DAO 活性。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

天平、低温离心机、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、蒸馏水、无水乙醇、研钵/匀浆器、水浴锅。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g,4℃离心20min,取上清,置冰上待测。

2. 细菌、细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g,4℃,离心10min 取上清置于冰上待测

3. 血清等液体:直接测定。

二、测定步骤

1. 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 500nm,蒸馏水调零。

2. 操作表

 

对照管

测定管

样本(mL

0.25

0.25

提取液(mL

0.59

0.59

试剂一(mL

0.01

0.01

试剂二(mL

0.1

0.1

试剂三(mL

-

0.05

无水乙醇(mL

0.05

-

混匀,37℃水浴 30min 后于 1mL 玻璃比色皿中测定 500nm 下吸光度,ΔA=A 测定-A 对照。

三、酶活性计算公式

1、组织 DAO 活力的计算

(1) 按蛋白浓度计算

单位的定义 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生 1μmol 氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

DAO(U/mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V 反总÷(Cpr×V 样本)÷T=18×ΔA÷Cpr

(2) 按样本质量计算

单位的定义:每 g 组织在反应体系中每分钟催化产生 1μmol 氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

DAO(U/g 质量)=ΔA÷(ε×d)×V 反总÷(W÷V 提取×V 样本)÷T=18×ΔA÷W

2、血清(浆)DAO 活力的计算

单位的定义:每 mL 血清(浆)在反应体系中每分钟催化产生 1μmol 氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

DAO(U/mL)=ΔA÷(ε×d)×V 反总÷V 样本÷T=18×ΔA 3、按细胞数量计算

单位的定义:每 104 个细胞在反应体系中每分钟催化产生 1μmol 氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

DAO(U/104 cell)=ΔA÷(ε×d)×V 反总÷(500÷V 提取×V 样本)÷T=0.036×ΔA

ε:氧化型邻联茴香胺消光系数,7.5×10-3mL/μmol/cm;d:1mL 玻璃比色皿光径,1cm;V 反总:反应总体积, 1mL;V 样本:加入样本的体积,0.25mL;V 提取:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W 样本质量,g;T:反应时间,30min;500:细胞总数,500 万。

注意事项:

1 如果 ΔA 小于 0.01,适当加大提取用样本质量;ΔA 大于 0.8,样本可用提取液适当稀释,或者减少提取用样本质量。

2、 样本蛋白质含量需要另外测定。


上一篇:多聚半乳糖醛酸酶(PG)活性检测试剂盒-植物试剂盒-多聚半乳糖醛酸酶试剂盒
下一篇:二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)活性检测试剂盒-植物试剂盒-二磷酸核酮糖羧化酶试剂盒

独立公正 方法科学 规范严谨 服务周到

咨询热线
400-998-2324
欢迎关注官方微信
版权所有:上海液质检测技术有限公司    网站备案号:沪ICP备2022005945号
400-998-2324
0.048118s