上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购

货号：UPLC-MS-4144

规格：50T/24S

可见分光光度法

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

溶液的配制：

1、 试剂一：若溶液中有晶体析出，37℃水浴溶解；

2、 试剂二：临用前加入 8 mL 蒸馏水，60℃水浴助溶；

3、 标准品：10mg 半乳糖醛酸。临用前加入 0.943 mL 蒸馏水，配成 50 μmol/mL 的标准液。

产品说明：

PG 水解多聚半乳糖醛酸生成半乳糖醛酸，半乳糖醛酸与 DNS 试剂反应生成在 540 nm 有特征吸收峰的棕红色物质，测定 540 nm 处吸光值变化可计算得果胶酶活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者

增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、低温台式离心机、水浴锅、1 mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1 : 5~10 的比例（建议称取约 0.1 g，加入 1 mL 提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于 4℃，16000 g，离心 10 min，取上清置于冰上待测。

细菌：先收集细菌到离心管内，离心后弃上清；按照细菌数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000︰1 的比例（建议 500 万个细菌加入 1 mL 提取液），冰浴超声波破碎细菌（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s， 总时间 5 min）；然后 4℃，16000 g，离心 10 min 取上清置于冰上待测。

液体：直接检测或用提取液稀释后检测。

二、测定步骤

1、 分光光度计预热 30 min 以上，调节波长至 540 nm，蒸馏水调零。

2、 将 50 μmol/mL 标准液用蒸馏水稀释为 10、6、4、3、2、1.5、1.2 μmol/mL 的标准溶液备用。

3、 操作表：(在 1.5mL 离心管中)

三、PG酶活计算

1、 标准曲线的绘制：

以各个标准溶液的浓度为 x 轴，其对应的 ΔA 标准为 y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程 y= kx+b，将 ΔA 带入方程得到 x（µmol/mL）

2、 PG 酶活的计算：

（1） 按样本蛋白浓度计算

酶活定义：在 40℃，pH 6.0 的条件下，每毫克蛋白每小时分解多聚半乳糖醛酸产生 1 μmol 的半乳糖醛酸定义为一个酶活力单位。

PG 酶活（U/mg prot）= x×V 提取÷（V 提取×Cpr）÷T = 0.5x÷Cpr

（2） 按样本质量计算

酶活定义：在 40℃，pH 6.0 的条件下，每克样本每小时分解多聚半乳糖醛酸产生 1 μmol 的半乳糖醛酸定义为一个酶活力单位。

PG 酶活（U/g 质量）= x×V 提取÷W÷T = 0.5x÷W

（3） 按照细菌数量计算

酶活定义：在 40℃，pH 6.0 的条件下，每 104 个细菌每小时分解多聚半乳糖醛酸产生 1 μmol 的半乳糖醛酸定义为一个酶活力单位。

PG 酶活（U/104 cell）= x×V 提取÷T÷细菌数量（万个）= 0.5x÷细菌数量（万个）

（4） 按液体体积计算

酶活定义：在 40℃，pH 6.0 的条件下，每 mL 样本每小时分解多聚半乳糖醛酸产生 1 μmol 的半乳糖醛酸定义为一个酶活力单位。