| 货号：UPLC-MS-4563 | 规格：100T/48S | 微量法 |
| 货号：UPLC-MS-4562 | 规格：50T/24S | 可见分光光度法 |
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试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
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提取液一 |
液体 30 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
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提取液二 |
液体 30 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
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试剂一 |
液体 30 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
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试剂二 |
粉剂×1 瓶 |
4℃保存 |
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标准品 |
粉剂×1 支 |
4℃保存 |
溶液的配制：
1、 提取液的配制：将提取液一和提取液二按体积比 1：1 的比例混合配制，按照样本数量配制并在当天用完；
2、 试剂二：临用前加入 2 mL 无水甲醇充分溶解备用，4℃可保存八周；
3、 标准品：10 mg 半胱氨酸，临用前加入 1.65 mL 提取液配制成 50 µmol/mL 的半胱氨酸标准溶液备用，4℃ 可保存 1 个月。
生物体内巯基主要包括非蛋白质巯基和蛋白质巯基。巯基化合物在体内具有重要的解毒功能，对生物体的自 我调节具有非常重要的生理意义。
巯基基团与5,5’-二硫代-双-硝基苯甲酸（DTNB）反应，生成黄色化合物，在412nm处有最大吸收峰。
最低检出限：0.0061 μmol/mL
线性范围：0.00625-0.8 μmol/mL
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、恒温水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、甲醇、研钵/匀浆器、超声破 碎仪、冰和蒸馏水。
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1. 动物、植物组织：称取约 0.1g，加入 1mL 的提取液，制备成 10%的匀浆，10000g，常温离心 10min，取上清置冰上待测。
2. 细胞或细菌：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细胞（功率 200w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min），然后 10000g，常温离心 10min，取上清置冰上待测。
3. 血清（浆）、培养液等液体样本：向 0.1mL 血清（浆）、培养液等液体样本中加入 1mL 提取液，10000g， 常温离心 10min，取上清置冰上待测。
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序号 |
稀释前浓度（µmol/mL） |
标准液体积（µL） |
提取液体积（µL） |
稀释后浓度（µmol/mL） |
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1 |
50 |
100 |
900 |
5 |
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2 |
5 |
80 |
920 |
0.4 |
|
3 |
0.4 |
200 |
200 |
0.2 |
|
4 |
0.2 |
200 |
200 |
0.1 |
|
5 |
0.1 |
200 |
200 |
0.05 |
|
6 |
0.05 |
200 |
200 |
0.025 |
|
7 |
0.025 |
200 |
200 |
0.0125 |
|
8 |
0.0125 |
200 |
200 |
0.00625 |
备注：实验中每个标准管需60µL标准溶液。
3. 操作表
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对照管 |
测定管 |
标准管 |
空白管 |
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上清液（μL） |
60 |
60 |
- |
- |
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标准溶液（μL） |
- |
- |
60 |
- |
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试剂一（μL） |
130 |
130 |
130 |
130 |
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试剂二（μL） |
- |
20 |
20 |
- |
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蒸馏水（μL） |
20 |
- |
- |
80 |
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涡旋混匀，室温准确反应 10min，吸取 200μL 于微量比色皿/96 孔板中测定 412nm 吸光值，分别记为 A 对照、A 测定、A 二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶（Rubisco）活性检测试剂盒-植物试剂盒-二磷酸核酮糖羧化酶试剂盒
独立公正 方法科学 规范严谨 服务周到 | ||||
