谷氨酸(Glu)含量检测试剂盒-植物试剂盒-谷氨酸试剂盒



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货号:UPLC-MS-4436  规格:50T/48S  紫外分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

试剂一

液体 110 mL×1

4℃保存

试剂二

液体 5 mL×1

4℃保存

试剂三

粉剂×1

-20℃保存

试剂四

粉剂×1

-20℃保存

标准液

液体 0.5 mL×1

4℃保存

溶液的配制:

1 试剂三:临用前加入 55 mL 试剂一;

2 试剂四:临用前加入 3.5 mL 试剂二;

3 标准品液:10 μmol/mL 谷氨酸标准品。

产品说明:

Glu广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,不仅是组成蛋白质的20种氨基酸之一,而且通过转氨基作用参与多种氨基酸合成,是生物体内主要氨基来源之一。此外,Glu还是味精的主要有效成分常用做食品添加剂以及香料生产。

谷氨酸脱氢酶(GDH)催化谷氨酸和NAD生成α-酮戊二酸、NADH和NH +,引起340nm处吸光度的上升,通过测定340nm吸光度的变化,计算谷氨酸含量。

技术指标:

最低检出限:0.023 μmol/mL

线性范围: 0.025-0.5 μmol/mL

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

细菌、细胞:收集细胞或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每 1000 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一,超声波破碎细菌或细胞(功率 20%,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次),10000rpm,常温离心 10min,取上清待测。

组织样本:称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一进行冰浴匀浆,10000rpm,常温离心 10min,取上清待测。

二、测定步骤

1. 紫外分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

2. 标准溶液的制备:将标准品分别稀释为0.5、0.4、0.3、0.2、0.1、0.05、0.025μmol/mL的标准溶液。

3. 在1mL石英比色皿中加入下列试剂:

(1) 标准管:在1mL石英比色皿中加入200μL标准溶液、800μL试剂三和50μL试剂四混匀,立即记录340nm处20s时的吸光值为A1和5min20s时的吸光值A2,计算∆A标准=A2-A1。

(2) 测定管:在1mL石英比色皿中加入200μL样本、800μL试剂三和50μL试剂四混匀,立即记录340nm处20s时的吸光值为A1和5min20s时的吸光值A2,计算∆A =A2-A1。

三、谷氨酸含量计算

1. 标准曲线的绘制:以谷氨酸含量(µmol/mL)为x轴, ∆A标准为y轴,绘制标准曲线y=kx+b。将测定管∆A带入方程得到x值(µmol/mL)。

2. 氨基酸含量计算:

(1) 按照蛋白浓度计算:谷氨酸含量(µmol/mg prot)= x×V样本÷(Cpr×V样本)=x÷Cpr。

(2) 按照样本质量计算:谷氨酸含量(µmol/g 质量)= x×V样本÷(W÷V样总×V样本)=x÷W。

(3) 按照细菌或细胞数量计算:谷氨酸含量(μmol/104 cell)=x×V样本÷(1000÷V样总×V样本)=0.001x。V样总:加入提取液体积,1mL;V样本:加入的样本体积,0.2mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样

本质量,g;1000:细菌或细胞总数,1000万。

注意事项:

如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。


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