上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
| 货号：UPLC-MS-4304 | 规格：100T/48S | 微量法 |
| 货号：UPLC-MS-4303 | 规格：50T/24S |
可见分光光度法 |
|
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
|
提取液 |
液体 50 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
|
试剂一 |
液体 15 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
|
试剂二 |
液体 15 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
产品说明：
花色苷是一类可食用的易溶于水等溶剂的天然色素。花色苷使植物呈现多彩的颜色，本身更具有多种保健作 用，因而在天然食用色素、保健品和医药行业都有着广阔的应用前景。
根据花色苷在不同pH下的结构性质测定花色苷含量，在pH为1时花色苷在530nm处有最大吸收峰,而当pH为4.5 时，花色苷转变为无色查尔酮形式在530nm处无吸收峰，通过测定不同pH下的530nm和700nm处的吸光度值计算样本中花色苷的含量。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器和蒸馏水。
按照样本质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 样本，加入 1mL 提取液），充分匀浆后转移到 EP 管中，提取液定容至 1mL，盖紧后 60℃浸提 30min，期间可震荡数次。12000rpm，常温离心 10min，取上清液待测。
1. 可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，可见分光光度计蒸馏水调零。
2. 加样表：在96孔板中分别加入
|
试剂名称（μL） |
测定管1 |
测定管2 |
|
样本 |
20 |
20 |
|
试剂一 |
180 |
- |
|
试剂二 |
- |
180 |
充分混匀后测定测定管 1 和测定管 2 分别在 530nm 和 700nm 处的吸光度，测定管 1 在 530nm 和 700nm 处的
吸光值记为 A1、A1’，测定管 2 在 530nm 和 700nm 处的吸光值记为 A2、A2’，计算ΔA=（A1-A1’）-（A2-A2’）。
三、花色苷含量计算
1．按样本质量计算：
花色苷含量（μmol/g 质量）=[ΔA÷(ε×d)×103×F]×V提取÷W=0.037×ΔA× F÷W 2．按样本蛋白浓度计算
花色苷含量（μmol/mg prot）=[ΔA÷(ε×d)×103×F]×V提取÷(Cpr ×V提取)=0.037×ΔA×F÷Cpr
F：稀释倍数，该反应体系下为10；d：比色皿光径，1cm；W：样本质量，g；ε：花色苷的摩尔消光系数， 2.69×104mL/mmol/cm；V提取：提取液总体积，1mL；103：单位换算系数，1mmol=103μmol；Cpr：样本蛋白浓度， mg/mL（蛋白浓度需用PBS单独提取后自行测定）。
1. 按样本质量计算
花色苷含量（μmol/g 质量）=[ΔA÷(ε×d)×103×F] ×V提取÷W=0.062×ΔA× F÷W
2. 按样本蛋白浓度计算
花色苷含量（μmol/mg prot）=[ΔA÷(ε×d)×103×F] ×V提取÷(Cpr×V提取)=0.062×ΔA×F÷Cpr
F：稀释倍数，该反应体系下为10；d：96孔板光径，0.6cm；W：样本质量，g；ε：花色苷的摩尔消光系数， 2.69×104mL/mmol/cm；V提取：提取液总体积，1mL；103：单位换算系数，1mmol=103μmol；Cpr：样本蛋白浓度， mg/mL（蛋白浓度需用PBS单独提取后自行测定）。
1. 如果A1大于1，可以适当加大稀释倍数，保证总体积1mL不变，如10μL上清液和180μL试剂一（相当于稀释20 倍）；如果A1小于0.1，可以适当缩小稀释倍数，保证总体积不变，如100μL上清液和100μL试剂一（相当于稀释2倍），使A1保持在0.1~1范围内，可提高检测灵敏度；注意应同样调整上清液和试剂二体积比例；计算时以实际稀释倍数代入计算公式中。
2. 因提取液会使蛋白变性，若使用蛋白浓度计算需用PBS单独提取后自行测定。
独立公正 方法科学 规范严谨 服务周到
