植物脱氢酶(PDHA)活性检测试剂盒-植物试剂盒-脱氢酶试剂盒



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货号:UPLC-MS-4283 规格:100T/48S  微量法
货号:UPLC-MS-4282 规格:50T/24S  可见分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

试剂一

粉剂×2

4℃保存

试剂二

液体 100 mL×2

4℃保存

试剂三

液体 100 mL×1 瓶(自备)

4℃保存

溶液的配制:

1 试剂一:使用前加少量水溶解,定容至 50 mL,避光、4℃保存(尽量现配现用);

2 试剂三:自备乙酸乙酯。

产品说明:

生物体的脱氢酶(Plant dehydrogenase , PDHA)的活性在很大程度上反映了生物体的活性状态,能直接表示生物细胞对其基质降解能力的强弱。

受氢体2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride,即TTC)在细胞呼吸过程中接受氢以后, 其还原产物三苯基甲替(TriphenylFormazone,即TFF)呈现红色,在波长485nm处有最大吸收峰,采用分光光度法于485nm测定其吸光值,即得植物脱氢酶活性。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者

增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板(非聚苯乙烯/聚丙烯材质)、可调式移液枪、冰、研钵/匀浆器、蒸馏水、乙酸乙酯(不允许快递,请用户自备)。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

称取 0.1g 的植物组织,用双蒸水清洗 3-4 次,用滤纸吸干水分,备用。

二、测定步骤

1 可见分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至485nm,乙酸乙酯调零。

2 操作表:取5mLEP管依次加入

加入试剂

对照管

测定管

样本(g

0.1

0.1

试剂一(mL

 

1

试剂二(mL

2

1

充分混匀,37℃,暗培养3h,取出后立即冰浴5min,去滤液,尽量用滤纸吸干样本,置于研钵/匀浆器中。

试剂三(mL

1

1

充分研磨(建议在通风橱操作)后全部移至于离心管中,用少量试剂三冲洗研钵,一起加入离心管,用试剂三定容至 2mL10000rpm/min4℃,离心 5min,取 200μL 上清至微量玻璃比色皿或 96 孔板中,测定 485nm下的吸光值。计算 ΔA=A 测定-A 对照。


三、脱氢酶活力计算

A:用微量玻璃比色皿(光径,1cm)测定的计算公式如下

酶活单位定义:在37℃时,每小时每克组织样本使反应体系吸光值每增加0.01为一个酶活单位。脱氢酶活性(U/g 质量)=ΔA÷0.01÷T÷W=33×ΔA÷W

B:用96孔板(光径,0.6cm)测定的计算公式如下

酶活单位定义:在37℃时,每小时每克组织样本使反应体系吸光值每增加0.005为一个酶活单位。脱氢酶活性(U/g 质量)=ΔA÷0.005÷T÷W=66.7×ΔA÷W

T:反应时间,3h;W:样本质量,g。

注意事项:

1 配制好的试剂一避光保存于4℃,尽量在一周内使用,若出现红色,则不能使用。

2 试剂三易挥发,有毒,为了您的健康,请穿实验服,戴口罩,戴乳胶手套操作。

3 反应完成后立即冰浴以终止反应,并去除干净残留的反应液。

4 如果测定出来的吸光值较大,需把样本适当稀释再进行测定,注意计算公式乘以稀释倍数。

5 如果用96孔板进行检测,建议不要使用聚苯乙烯/聚丙烯材质的96孔板。


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