上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测,Elisa代测,HPLC 检测,GC检测,GC-MS 检测,LC-MS检测,ICP-MS检测 、土壤、植物、动物,成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
货号:UPLC-MS-4283 | 规格:100T/48S | 微量法 |
货号:UPLC-MS-4282 | 规格:50T/24S | 可见分光光度法 |
试剂名称
规格
保存条件
试剂一
粉剂×2 瓶
4℃保存
试剂二
液体 100 mL×2 瓶
4℃保存
试剂三
液体 100 mL×1 瓶(自备)
4℃保存
溶液的配制:
1、 试剂一:使用前加少量水溶解,定容至 50 mL,避光、4℃保存(尽量现配现用);
2、 试剂三:自备乙酸乙酯。
生物体的脱氢酶(Plant dehydrogenase , PDHA)的活性在很大程度上反映了生物体的活性状态,能直接表示生物细胞对其基质降解能力的强弱。
受氢体2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride,即TTC)在细胞呼吸过程中接受氢以后, 其还原产物三苯基甲替(TriphenylFormazone,即TFF)呈现红色,在波长485nm处有最大吸收峰,采用分光光度法于485nm测定其吸光值,即得植物脱氢酶活性。
增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板(非聚苯乙烯/聚丙烯材质)、可调式移液枪、冰、研钵/匀浆器、蒸馏水、乙酸乙酯(不允许快递,请用户自备)。
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
称取 0.1g 的植物组织,用双蒸水清洗 3-4 次,用滤纸吸干水分,备用。
1、 可见分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至485nm,乙酸乙酯调零。
2、 操作表:取5mLEP管依次加入
加入试剂 |
对照管 |
测定管 |
样本(g) |
0.1 |
0.1 |
试剂一(mL) |
|
1 |
试剂二(mL) |
2 |
1 |
充分混匀,37℃,暗培养3h,取出后立即冰浴5min,去滤液,尽量用滤纸吸干样本,置于研钵/匀浆器中。 |
||
试剂三(mL) |
1 |
1 |
充分研磨(建议在通风橱操作)后全部移至于离心管中,用少量试剂三冲洗研钵,一起加入离心管,用试剂三定容至 2mL,10000rpm/min,4℃,离心 5min,取 200μL 上清至微量玻璃比色皿或 96 孔板中,测定 485nm下的吸光值。计算 ΔA=A 测定-A 对照。 |
A:用微量玻璃比色皿(光径,1cm)测定的计算公式如下
酶活单位定义:在37℃时,每小时每克组织样本使反应体系吸光值每增加0.01为一个酶活单位。脱氢酶活性(U/g 质量)=ΔA÷0.01÷T÷W=33×ΔA÷W
B:用96孔板(光径,0.6cm)测定的计算公式如下
酶活单位定义:在37℃时,每小时每克组织样本使反应体系吸光值每增加0.005为一个酶活单位。脱氢酶活性(U/g 质量)=ΔA÷0.005÷T÷W=66.7×ΔA÷W
T:反应时间,3h;W:样本质量,g。
1、 配制好的试剂一避光保存于4℃,尽量在一周内使用,若出现红色,则不能使用。
2、 试剂三易挥发,有毒,为了您的健康,请穿实验服,戴口罩,戴乳胶手套操作。
3、 反应完成后立即冰浴以终止反应,并去除干净残留的反应液。
4、 如果测定出来的吸光值较大,需把样本适当稀释再进行测定,注意计算公式乘以稀释倍数。
5、 如果用96孔板进行检测,建议不要使用聚苯乙烯/聚丙烯材质的96孔板。
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