上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测,Elisa代测,HPLC 检测,GC检测,GC-MS 检测,LC-MS检测,ICP-MS检测 、土壤、植物、动物,成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
试剂一 |
粉剂×2 支 |
4℃保存 |
试剂二 |
液体 50 mL×1 瓶 |
4℃保存 |
标准品 |
粉剂×1 支 |
4℃保存 |
溶液的配制:
1、 试剂一:临用前根据用量每支加入 0.5 mL 浓硫酸充分溶解。配制好后尽快使用,4℃可保存一周。
2、 标准品:10 mg 硝酸钾,临用前加入 0.935 mL 蒸馏水溶解,配成 1400 μg/mL 的 NO3-N 标准液。
硝酸盐是植物吸收的主要含氮物质之一。硝酸盐在植物体内的还原部位不同,可以在根内,也可以在枝叶内进行,且因植物类别和环境条件而异。因此,测定植物体内硝态氮含量变化对了解氮代谢机制有重要的意义。
在浓酸条件下,NO -可以与水杨酸反应,生成硝基水杨酸,后者在PH>12的条件下呈黄色,在一定范围内, 其颜色深浅与含量成正比,可比色测定计算得硝态氮含量。
最低检出限:0.4631 μg/mL
线性范围:3.5-140 μg/mL
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、浓硫酸、冰和蒸馏水。
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
按照质量(g):蒸馏水体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 样本,加入 1mL 蒸馏水)加入蒸馏水, 室温匀浆后置于 90℃恒温水浴锅中浸提 30min,期间不断晃动或者置于 90℃恒温摇床中振荡提取 30min,待冷却后于 25℃,12000g 离心 15min,取上清待测。
1. 分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至410nm,分光光度计蒸馏水调零。
2. 将1400μg/mL NO3-N标准液用蒸馏水50倍稀释成28μg/mL的标准溶液。
3. 操作表:
试剂名称 |
测定管 |
对照管 |
标准管 |
空白管 |
样本(μL) |
8 |
8 |
|
|
标准溶液(μL) |
|
|
8 |
|
蒸馏水(μL) |
|
12 |
|
8 |
试剂一(μL) |
12 |
- |
12 |
12 |
充分混匀,25℃静置30min |
||||
试剂二(μL) |
280 |
280 |
280 |
280 |
混匀,涡旋振荡,使出现的沉淀充分溶解,取 200μL 于微量玻璃比色皿/96 孔板中测定 410nm 处吸光值 A,计算 ΔA=A 测定管-A 对照管,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。 |
1. 按样本质量计算
NO - N含量(μg/g 质量)=ΔA÷(ΔA标准÷C标准)×V提取÷W=28×ΔA÷ΔA标准÷W
2. 按样本蛋白浓度计算
NO - N含量(μg/mg prot)=ΔA÷(ΔA标准÷C标准)×V提取÷(Cpr×V提取)=28×ΔA÷ΔA标准÷Cpr
W:样本质量,g;C标准:标准溶液浓度,28μg/mL;V提取:样本总体积,0.3mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL。
1、 试剂一和试剂二均具有强腐蚀性,操作时需做好防护措施。
2、 如果样本吸光值大于 1.5,建议将样本用蒸馏水稀释后进行测定。
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