植物蔗糖含量检测试剂盒



产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

提取液

液体 100 mL×1

4℃保存

试剂一

粉剂 10mg×1

4℃保存

试剂二

液体 2mL×1

4℃保存

试剂三

液体 20 mL×1

4℃保存

试剂四

液体 5 mL×1

4℃保存

试剂五

粉剂 0.5g×1

常温保存

溶液的配制:

试剂一:临用前加1mL蒸馏水溶解,用水稀释10倍,备用,即1mg/mL。

产品说明:

蔗糖是植物光合作用的主要产物,也是糖分运输和储藏的主要形式。因此,测定蔗糖含量对于植物糖代谢具有重要意义。此外,蔗糖含量是饮料﹑蜂蜜、果脯﹑糖果和乳制品等产品质量控制的重要指标之一。先用碱与样本共热,破坏其中的还原糖。然后在酸性条件下将蔗糖水解生成葡萄糖和果糖,果糖进一步与间苯二酚反应,生成有色物质,在480nm 下有特征吸收峰。

技术指标:

最低检出限:0.0316 mg/mL

线性范围:0.039-12 mg/mL

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/匀浆器、蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

称取0.1g 样本,常温研碎,加入0.5mL 提取液,适当研磨后快速转移到离心管中,置于80℃水浴锅中10min 振荡3~5  次,冷却后,4000g,25℃离心10min,取上清,加入2mg试剂五,80℃脱色30min,再加入0.5mL  提取液,4000g,25℃离心10min,取上清液测定。

二、测定步骤

1 可见分光光度/酶标仪计预热30min 以上,调节波长至480nm,蒸馏水调零。

2 样本测定(在1.5mL EP管中依次加入下列试剂):


试剂(μL

空白管

标准管

测定管

样本

 

 

25

试剂一

 

25

 

蒸馏水

25

 

 

试剂二

15

15

15

混匀,100℃煮沸5min左右(盖紧,防止水分散失)

试剂三

175

175

175

试剂四

50

50

50

混匀,沸水浴 10min 左右,冷却后取 200μL 至微量玻璃比色皿或 96 孔板中测定 480nm 处的吸光值,空白管、标准管和测定管分别记为 A1、A2  A3。

三、蔗糖含量计算

1、按照样本蛋白浓度计算

蔗糖含量(mg/mg prot)= (C 标准管×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1) ÷(V1×Cpr)= (A3-A1)÷(A2-A1) ÷Cpr

此法需要自行测定蛋白浓度。

2、按照样本质量计算

蔗糖含量(mg/g 质量)=(C 标准管×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)=(A3-A1)÷(A2-A1)÷W

C 标准管:标准管浓度,1mg/mL;V1:加入样本体积,0.025mL;V2:加入提取液体积,1mL Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。

注意事项:

当样本吸光值大于 1.4 时,建议将样本用提取液稀释后进行测定。


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