上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
货号：UPLC-MS-4295 规格：50T/24S 可见分光光度法
货号：UPLC-MS-4296 规格：100T/48S 微量法
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试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
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提取液 |
液体 80 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂一 |
液体 25 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂二 |
粉剂×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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标准品 |
粉剂×1 支 |
2-8℃保存 |
溶液的配制：
1. 试剂二：临用前加 25 mL 提取液，充分溶解。配制好的试剂二应尽快使用，2-8℃保存时间不超过一个月；
2. 标准品：10 mg 原花青素。临用前加入 1mL 提取液，充分溶解得到 10 mg/mL 标准液，2-8℃保存两周；
3. 工作液：临用前按照用量将试剂一和试剂二按照 1:1 混合，现用现配。用多少配多少。
原花色素（Oligomeric Proantho Cyanidins，OPC）是一类黄烷醇单体及其聚合体的多酚化合物，广泛存在于植物的各种器官中，具有极强的抗氧化性和清除自由基的作用，广泛的应用于医药，食品，化妆品，保健品行业。在酸性条件下，植物原花青素A环上的间苯二酚和间苯三酚与香草醛发生缩合反应，产生有色化合物，在500nm 处有特征吸收峰，测定500nm光吸收值，可计算植物中原花青素的含量。
最低检出限：0.0622 mg/mL
线性范围：0.078-5 mg/mL
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、天平、台式离心机、粉碎仪、超声清洗仪、30-50目筛和蒸馏水。
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
将样本烘干至恒重，粉碎，过 30-50 目筛之后，称取约 0.1g，加入 1mL 提取液，用超声提取法进行提取（功率 300W，温度 25℃，时间 30min）；12000rpm，25℃，离心 10min，取上清，用提取液定容至 1mL，待测。
1. 分光光度计预热30min以上，调节波长至500nm，蒸馏水调零。
2. 标准溶液制备：将10mg/mL标准液用提取液稀释为4、3、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.15625mg/mL的标准溶液。
3. 标准液稀释可参考下表：
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序号 |
稀释前浓度（mg/mL） |
标准液体积（µL） |
提取液体积（µL） |
稀释后浓度（mg/mL） |
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1 |
10 |
200 |
300 |
4 |
|
2 |
10 |
150 |
350 |
3 |
|
3 |
10 |
125 |
375 |
2.5 |
|
4 |
2.5 |
500 |
500 |
1.25 |
|
5 |
1.25 |
500 |
500 |
0.625 |
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6 |
0.625 |
500 |
500 |
0.3125 |
|
7 |
0.3125 |
500 |
500 |
0.15625 |
备注：实验中每个标准管需 200µL 标准溶液。
4. 操作表
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试剂名称 |
对照管 |
测定管 |
标准管 |
空白管 |
|
样本（μL） |
200 |
200 |
- |
- |
|
标准溶液（μL） |
- |
- |
200 |
- |
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工作液（μL） |
- |
800 |
800 |
800 |
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H2O（μL） |
800 |
- |
- |
200 |
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涡旋混匀，置于 30℃水浴中准确反应 30min，取反应液于 1mL 玻璃比色皿中检测 500nm 处吸光值，计算∆A 测定=A 测定管-A 对照管，∆A 标准=A 标准管-A 空白管。每个测定管需设一个对照管，标准曲线和空 白管只需测 1-2 次。 |
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1. 根据标准管的浓度（x，mg/mL）和吸光度ΔA标准（y，ΔA标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测定（y，ΔA测定）带入公式计算样本浓度（x，mg/mL）。
2. OPC的计算：
（1） 按样本质量计算：OPC含量（mg/g 质量）=x×V提取÷W=x÷W
（2） 按样本蛋白浓度计算：OPC含量（mg/mg prot）=x×V提取÷（Cpr×V提取）=x÷Cpr V提取：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
1、如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定，注意同步修改计算公式。
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