植物组织果糖(FT)含量检测试剂盒



试剂名称

规格

保存条件

提取液

液体 110 mL×1

2-8℃保存

试剂一

粉剂×1

2-8℃保存

试剂二

液体 40 mL×1

2-8℃保存

试剂三

液体 10 mL×1

2-8℃保存

试剂四

粉剂 0.5 g×1

常温保存

溶液的配制:

试剂一:10mg 果糖。临用前加 1mL 蒸馏水溶解,得到 10mg/mL 的果糖标准液,2-8℃保存两周。

产品说明:



 果糖是一种最为常见的己酮糖,是葡萄糖的同分异构体,以游离状态大量存在于水果的浆汁和蜂蜜中,能与葡萄糖结合生成蔗糖。果糖是最甜的单糖,广泛应用于食品、医药、保健品生产中。在酸性条件下果糖与间苯二酚反应,生成有色物质,在480nm下有特征吸收峰。


技术指标:

  

最低检出限:0.0141 mg/mL

线性范围:0.25-25 mg/mL

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

称取约 0.1g 样本,常温研碎;加入 1mL 提取液,适当研磨后快速转移到有盖离心管中;置于 80℃水浴锅中10min(盖紧,以防止水分散失),振荡 3~5 次,冷却至室温后,4000g,常温离心 10min,取上清;加入少量(约2mg)试剂四,80℃脱色 30min(盖紧,以防止水分散失);再加入 1mL 提取液,4000g,常温离心 10min,取上清液测定。

二、测定步骤

1 可见分光光度计预热30min 以上,调节波长至480nm,蒸馏水调零。

2 试剂一的稀释:取200μL 10mg/mL果糖标准液,加入300μL蒸馏水,充分混匀,配制成4mg/mL标准液使用, 现用现配。(实验中每管需要100μL,为减小实验误差,故配制大体积。)

3 样本测定(在1.5mL EP管中依次加入下列试剂):

试剂(μL

空白管

标准管

测定管

样本

 

 

100

试剂一

 

100

 

蒸馏水

100

 

 

试剂二

700

700

700

试剂三

200

200

200

涡旋混匀,置于 80℃水浴锅中准确反应 10min(盖紧,以防止水分散失),冷却至室温后测定 480nm 处光吸收值,记为 A 空白管、A 标准管、A 测定管,并计算 ΔA 测定=A 测定管-A 空白管、ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。标准管和空白管只需测 1-2 次。

三、果糖含量计算

1、按样本蛋白浓度计算

果糖含量(mg/mg prot)=C标×ΔA测定÷ΔA标准×V 样总÷(Cpr×V 样总)=4×ΔA测定÷ΔA标准÷Cpr 2、按样本质量计算

果糖含量(mg/g 质量)=C标×ΔA测定÷ΔA标准×V 样总÷W =8×ΔA测定÷ΔA标准÷W

C标:标准品浓度,4mg/mL;W:样本质量,g;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;V样总:提取液体积,2mL。

如果样本吸光值大于1.3,建议将样本用提取液稀释后进行测定。计算公式中注意乘以稀释倍数。


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