土壤过氧化氢酶(S-CAT)活性检测试剂盒




试剂名称

规格

保存条件

试剂一

液体 0.3 mL×1

2-8℃保存

试剂二

粉剂×1

2-8℃保存

试剂三

液体 3 mL×1

2-8℃保存

溶液的配制:

1 试剂一:液体置于试剂瓶内 EP 管中,使用前需将 EP 管先离心。临用前取 0.05 mL 试剂一加入 9.95 mL蒸馏水稀释待用或者按比例配制。用不完的试剂 2-8℃保存一周;

2 试剂二:临用前加入 1 mL 蒸馏水充分溶解待用,用不完的试剂 2-8℃保存 4 周。

产品说明:

S-CAT是土壤微生物代谢的重要酶类,在H2O2清除系统中具有重要作用。

H2O2 240nm 下有特征吸收峰,通过测定与土壤反应后溶液在此波长下吸光度的变化,即可反应 S-CAT 性的高低。


注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板(UV板)、研钵、

30~50目筛和蒸馏水、。

操作步骤:

一、 样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献) 

新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干,过 30~50 目筛。

二、 测定步骤

1 分光光度计/酶标仪预热30min 以上,调节波长至240nm,分光光度计用蒸馏水调零。

2 加样表(1.5ml EP 管):

试剂名称

测定管

无基质管

无土管

风干土样(g

0.03

0.03

 

试剂一(μL

260

 

260

蒸馏水(μL

 

260

 

25℃振荡培养 20min


试剂二(μL

10

10

10

混匀 8000g25℃离心 5min,取全部上清

试剂三(μL

30

30

30

混匀,取200μL至微量石英比色皿或96孔板(UV板)中,240nm处记录各管吸光值A。(每个测定管要设一个无基质管,无土管只要做1-2管)

三、 S-CAT活性计算

A、用微量石英比色皿测定的计算公式如下

单位的定义:每天每g风干土样催化1mmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。

计算公式:S-CAT(U/g 土样)=[(A无土管-A测定管+A无基质管)×V 反总÷(ε×d)×10 3]÷W÷T

=16.5×(A无土管-A测定管+A无基质管)

V反总:反应体系总体积,3×10 -4 L;ε:过氧化氢摩尔消光系数,43.6 L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;T 反应时间,20 min=1/72d;W:样本质量,0.03g。

B、用96孔板测定的计算公式如下

单位的定义:每天每g风干土样催化1mmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。

计算公式:S-CAT(U/g 土样)=[(A无土管-A测定管+A无基质管)×V 反总÷(ε×d)×10 3]÷W÷T

=27.5×(A无土管-A测定管+A 无基质管)

V反总:反应体系总体积,3×10 -4L;ε:过氧化氢摩尔消光系数,43.6 L/mol/cm;d:96孔板光径,0.6cm T:反应时间,20 min=1/72d;W:样本质量,0.03g。

注意事项:

如果吸取的上清仍有部分浑浊,可以在加入试剂三后统一再次进行离心。

 


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