上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测,Elisa代测,HPLC 检测,GC检测,GC-MS 检测,LC-MS检测,ICP-MS检测 、土壤、植物、动物,成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
货号:UPLC-MS-4041 规格:100T/48S 微量法
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
试剂一 |
液体 3mL×1 瓶(自备) |
常温保存 |
试剂二 |
液体 20mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
试剂三 |
液体 25mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
试剂四 |
液体 3mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
试剂五 A |
粉剂×3 瓶 |
2-8℃保存 |
试剂五 B |
液体 40mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
标准品 |
粉剂×1 支 |
2-8℃保存 |
溶液的配制:
1、 试剂一:自备甲苯。
2、 试剂三:悬浊液,使用前摇匀。
3、 试剂四刚从低温(2-8℃)条件取出会有晶体析出,加热使其溶解即可。
4、 试剂五:临用前取 1 瓶加入 12mL 试剂五 B,充分溶解,现配现用。用不完的试剂 2-8℃可以保存 4 周。
5、 标准液:5mg N-乙酰氨基葡萄糖。临用前加入 1mL 试剂二配制成 5mg/mL 的标准溶液,即 5000μg/mL 的标准溶液,2-8℃可以保存 4 周。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、可调式移液器、旋涡振荡混匀仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵、目筛、蒸馏水与甲苯(不允许快递)、水浴锅/恒温培养箱。
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
新鲜土样风干,过 30-50 目筛。 称取约 0.1g 土样,加入 0.05mL 试剂一,混匀,常温静置 15min。静置结束后,加入 0.2mL 试剂二与 0.4mL 试剂三,37℃振荡反应 24h,8000rpm,4℃离心 10min(若离心后上清中仍杂质,建议将上清再次离心,至澄清),取上清液置于冰上待测。
二、测定步骤
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 585nm,分光光度计用蒸馏水调零。
2、 标准品溶液的配制:临用前将 5000μg/mL 的标准溶液用试剂二稀释 80 倍至 62.5 μg/mL 标准溶液备用。取 25μL5000μg/mL 的标准溶液,加 1975μL 试剂二,充分混匀,配制成 62.5μg/mL 标准液使用,现用现配。(实验中每管需要 100μL,为减小实验误差,故配制大体积。)
3、 在 EP 管中进行以下操作:
试剂名称 |
对照管 |
测定管 |
空白管 |
标准管 |
上清液(μL) |
100 |
100 |
- |
- |
试剂二(μL) |
- |
- |
100 |
- |
标准液(μL) |
- |
- |
- |
100 |
试剂四(μL) |
20 |
20 |
20 |
20 |
|
混匀,常温静置 5min |
混匀,沸水浴 5min,流水冷却至常温 |
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试剂五(μL) |
300 |
300 |
300 |
300 |
涡旋混匀,37℃水浴锅/恒温培养箱 20min,吸取 200μL 反应液于微量玻璃比色皿/96 孔板中测定 585nm 处吸光值,分别记为 A 对照、A 测定、A 空白、A 标准。计算ΔA 测定=A 测定- A 对照,ΔA 标准=A 标准 - A 空白。标准管和空白管只需测 1-2 次。 |
酶活性定义:37℃条件下,每克土壤每天分解几丁质产生 1μg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。土壤几丁质酶活性(U/g 土样)=(ΔA 测定÷ΔA 标准×C 标)×V 反总÷W÷T=40.625×ΔA 测定 ÷ΔA 标准÷W
C 标:标准管的浓度,62.5μg/mL;V 反总:样本处理总体积,0.65mL;W:样本质量,g;T:反应时间,1d。
2. 试剂五有一定的毒性,试验操作时做好个人防护。
3. 当 A 测定大于 1 时,建议将样本上清液用试剂二稀释后再进行测定。
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