上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
货号：UPLC-MS-4027 规格：100T/48S 微量法
货号：UPLC-MS-4026 规格：50T/24S 可见分光光度法
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试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
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试剂一 |
液体 2 mL×1 瓶(自备) |
2-8℃保存 |
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试剂二 |
粉剂×2 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂三 |
液体 40 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂四 |
液体 30 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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标准品 |
液体 1 mL×1 支 |
2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 试剂一：甲苯自备。
2、 试剂二：临用前每瓶加入 7.5 mL 试剂三，充分溶解备用，用不完的试剂仍 2-8℃保存一周。
3、 标准品：5 mmol/L 的对硝基苯酚溶液。
β-1,4-葡聚糖酶/纤维二糖水解酶(C1，EC3.2.1.91)存在于细菌、真菌和动物体内，是纤维素酶系的组份之一， C1酶作用于纤维素线状分子的末端，水解β-葡萄糖苷键，每次切下 1个纤维二糖分子。
S-C1能够催化对硝基苯纤维二糖苷(PNPC)生成对-硝基苯酚，后者在400nm有特征光吸收。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、 冰、30-50目筛、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。
1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上，波长调至400nm，分光光度计蒸馏水调零。
2、 标准品稀释：临用前取20μL 5 mmol/L的对硝基苯酚溶液，加入980μL试剂三，充分混匀，配制成100 μmol/L标准液使用，现用现配。（实验中每管需要100μL，为减小实验误差，故配制大体积。）
3、 加样表：
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试剂名称 |
测定管 |
对照管 |
标准管 |
空白管 |
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风干土样（g） |
0.03 |
0.03 |
- |
- |
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试剂一（μL） |
15 |
15 |
- |
- |
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振荡混匀，使土样润湿，室温放置15min |
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试剂二（μL） |
120 |
- |
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试剂三（μL） |
150 |
150 |
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混匀，于37℃水浴锅/恒温培养箱反应1h后，立即沸水浴5min（盖紧，防止水分散失），流水/冰浴冷却。 |
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试剂二（μL） |
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120 |
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10000rpm 25℃离心10min，取上清液 |
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上清液（μL） |
100 |
100 |
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标准品（μL） |
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- |
100 |
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蒸馏水（μL） |
- |
- |
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100 |
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试剂四（μL） |
200 |
200 |
200 |
200 |
充分混匀，室温静置 2min 后，吸取 200μL 于微量比色皿/96 孔板中测定 400nm 处的吸光值 A，分别记为 A 测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管。计算ΔA=A 测定管-A 对照管，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。每个测定管设一个对照管。标准管和空白管只需测 1-2 次。
单位的定义：每天每g土样中产生1μmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
S-C1活力（U/g土样）=ΔA÷ (ΔA标准÷C标准)×V反总÷W÷T =0.684×ΔA÷ΔA标准÷W
T：反应时间，1h=1/24d；V反总：反应体系总体积：2.85×10-4 L；C标准：标准溶液浓度，100μmol/L；W： 样本质量，g。
当吸光值大于1.5时，建议将上清液用试剂三稀释后测定或者减少土样质量测定。计算时同步修改计算公式。
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