土壤亮氨酸氨基肽酶(S-LAP)活性检测试剂盒



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购

货号:UPLC-MS-4067                            规格:100T/48S                      微量法

货号:UPLC-MS-4066                              规格:50T/24S                      可见分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

试剂一

液体 30 mL×1

2-8℃保存

试剂二

粉剂×2

2-8℃保存

溶液的配制:

1 试剂二:临用前取 1 瓶加入 1.875 mL 丙酮溶解,用不完的试剂 2-8℃保存一周。

产品说明:

S-LAP是一类能水解肽链N-末端为亮氨酸的酶,由土壤微生物分泌。S-LAP活性变化与机体某些病理状态密切相关。

S-LAP分解L-亮氨酸对硝基苯胺生成对硝基苯胺,后者在405nm有最大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算S-LAP活性。


注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、离心机、水浴锅、研钵、甲苯(不允许快递)、丙   酮(不允许快递)、30-50目筛、蒸馏水。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献) 

取新鲜土样自然风干或 37℃烘干,过 30-50 目筛。

二、测定步骤

1 分光光度计/酶标仪预热30min以上,波长调至405nm,分光光度计蒸馏水调零。

2 加样表:

 

测定管

对照管

风干土样(g

0.03

0.03

甲苯(μL

15

15

震荡混匀,室温静置15min

试剂一(μL

255

255


试剂二(μL

30

-

置于30℃水浴锅准确反应1h后,立刻煮沸5min盖紧,缠封口膜,防止崩开水分散失。流水冷却至室温。

试剂二(μL

-

30

14000g,常温离心10min,取200μL上清于405nm处测定吸光值,分别记为A测定管、A对照管,计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管需设一个对照管。

三、酶活计算公式

A 按微量比色皿计算:

酶活性定义:每克土壤每分钟生成1nmol对硝基苯胺为一个酶活力单位。

S-LAP 活性(U/g 土样)=ΔA÷(ε×d) ×109×V反总÷W÷T=0.507×ΔA÷W

ε:对硝基苯胺摩尔消光系数:9.87×103L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V反总:反应总体积,300μL=3×10-4L W:土样质量,g;T:反应时间,60min;109:单位换算系数,1mol=109nmol。

B 96孔板计算:

酶活性定义:每克土壤每分钟氧化1nmol对硝基苯胺为一个酶活力单位。

S-LAP 活性(U/g 土样)=ΔA÷(ε×d) ×109×V反总÷W÷T=0.844×ΔA÷W

ε:对硝基苯胺摩尔消光系数:9.87×103L/mol/cm;d:96孔板光径,0.6cm;V反总:反应总体积,300μL=3×10-4L W:土样质量,g;T:反应时间,60min;109:单位换算系数,1mol=109nmol。


上一篇:土壤碱性磷酸酶(S-AKP/ALP)活性检测试剂盒
下一篇:土壤木质素过氧化物酶(S-Lip)活性检测试剂盒

独立公正 方法科学 规范严谨 服务周到

咨询热线
400-998-2324
欢迎关注官方微信
版权所有:上海液质检测技术有限公司    网站备案号:沪ICP备2022005945号
400-998-2324
0.050268s