上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测,Elisa代测,HPLC 检测,GC检测,GC-MS 检测,LC-MS检测,ICP-MS检测 、土壤、植物、动物,成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
货号:UPLC-MS-4053 规格:100T/96S 微量法
货号:UPLC-MS-4052 规格:50T/48S 可见分光光度法
试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
试剂一 |
液体 42 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
试剂二 |
粉剂×1 瓶 |
2-8℃保存 |
试剂三 |
液体 2.5 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
试剂四 |
粉剂×2 支 |
2-8℃保存 |
标准品 |
液体 1 mL×1 支 |
2-8℃保存 |
溶液的配制:
1. 试剂二:临用前加 100 mL 蒸馏水充分溶解,2-8℃保存 8 周;
2. 试剂四:临用前取 1 支加 576 μL 无水乙醇(自备),24 μL 蒸馏水充分溶解。用不完的试剂 2-8℃保存一周(变褐色后不能再使用,一瓶即可以实验 100T,为延长反应时间故多给一瓶);
3. 标准品:0.5 μmol/mL 苯酚标准液。
土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷矿化的酶,其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性,是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和 pH 显著影响,根据最适 pH 范围,通常分为酸性、中性和碱性三种类型。
碱性环境中,S-AKP/ALP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠,通过测定酚的生成量即可计算出
需自备的仪器和用品:
分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、研钵、蒸馏水、30-50 目筛、乙醇和甲苯(不允许快递)。
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1. 新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干,过 30~50 目筛。
2. 称取风干混匀土壤约 0.1g,加入 0.05mL 甲苯(自备),轻摇 15min;加 0.4mL 试剂一并且摇匀后,置于37℃水浴锅/恒温培养箱,开始计时,催化反应 24h;到时后迅速加入 1mL 试剂二充分混匀,以终止酶催化的反应。10000rpm 室温离心 10min,取上清液置于冰上待测。
1. 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上,调节波长到 660nm,分光光度计蒸馏水调零。
2. 空白管:取微量比色皿/96 孔板,加入 10μL 试剂一,20μL 试剂三,4μL 试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水 166μL,混匀后室温静置 30min,于 660nm 测定吸光度,记为 A 空白管。(空白管只需要测定 1-2 次)
3. 标准管:取微量比色皿/96 孔板,加入 10μL 标准液,20μL 试剂三,4μL 试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水 166μL,混匀后室温静置 30min,于 660nm 测定吸光度,记为 A 标准管。(标准管只需要测定 1-2 次)
4. 测定管:取微量比色皿/96 孔板,加入 10μL 上清液,20μL 试剂三,4μL 试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水 166μL,混匀后室温静置 30min,于 660nm 测定吸光度,记为 A 测定管。
活性单位定义:37℃中每克土壤每天释放 1nmol 酚为 1 个酶活单位。
S-AKP/ALP(U/g 土样)=[C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]×V 总÷W÷T×1000
=725×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W
C 标准液:0.5μmol/mL;V 总:催化体系总体积,1.45mL;W:土壤样本质量,g;T:催化反应时间,24 h=1d; 1000:单位换算系数,1μmol=1000nmol。
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