上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
货号：UPLC-MS-4049 规格：100T/96S 微量法
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试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
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试剂一 |
液体 42 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂二 |
粉剂×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂三 |
液体 5 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂四 |
粉剂×2 支 |
2-8℃保存 |
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标准品 |
液体 1 mL×1 支 |
2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 试剂二：用前加 100 mL 蒸馏水充分溶解，2-8℃保存 8 周；
2、 试剂四：临用前取 1 瓶加 576 μL 无水乙醇（自备），24 μL 蒸馏水充分溶解，用不完的试剂可以 2-8℃保存 2 周（变褐色后不能再使用，一瓶即可以实验 100T，为延长反应时间故多给一瓶）；
3、 标准品：0.5 μmol/mL 苯酚标准液。
土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和 pH 显著影响，根据最适 pH 范围，通常分为酸性、中性和碱性三种类型。
酸性环境中，S-ACP 催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出 S-ACP 活性。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、分析天平、研钵、可调式移液器、30-50 目筛、冰、蒸馏水、乙醇和甲苯（不允许快递）。
1. 新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干，过 30~50 目筛。
2. 称取风干混匀土壤约 0.1g，加入 0.05mL 甲苯（自备），轻摇 15min；加 0.4 mL 试剂一并且摇匀后，置于37℃水浴锅/恒温培养箱，开始计时，催化反应 24h；到时间后迅速加入 1mL 试剂二充分混匀，以终止酶催化的反应。10000rpm 室温离心 10min，取上清液置于冰上待测。
1. 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长到 660nm，分光光度计蒸馏水调零。
2. 空白管：取微量玻璃比色皿/96 孔板，加入 10μL 试剂一，40μL 试剂三，4 μL 试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水 146μL，混匀后室温静置 30min，于 660nm 测定吸光度，记为 A 空白管。空白管只需做 1-2 次。
3. 标准管：取微量玻璃比色皿/96 孔板，加入 10μL 标准液，40μL 试剂三，4μL 试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水 146μL，混匀后室温静置 30min，于 660nm 测定吸光度，记为 A 标准管。标准管只需做 1-2 次。
4. 测定管：取微量玻璃比色皿/96 孔板，加入 10μL 上清液，40μL 试剂三，4μL 试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水 146μL，混匀后室温静置 30min，于 660nm 测定吸光度，记为 A 测定管。
活性单位定义：37℃中每克土壤每天释放 1nmol 酚为 1 个酶活单位。
S-ACP（U/g 土样）=[C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]×V 总×1000÷W÷T
=725×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W
C 标准液：0.5 μmol/mL；V 总：催化体系总体积，1.45mL；W：土壤样本质量，g；T：催化反应时间，24h=1d；
1000：单位换算系数，1μmol=1000nmol。
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