上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化、elisa、土壤、植物、细胞等试剂盒的生产厂家，并承接生化代测，Elisa代测，HPLC 检测，GC检测，GC-MS 检测，LC-MS检测，ICP-MS检测 、土壤、植物、动物，成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购
货号:UPLC-MS-4047 规格: 100T/48S 微量法
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试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
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试剂一 |
液体 15 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂二 |
液体 5 mL×1 瓶 |
常温保存 |
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试剂三 |
粉剂×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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试剂四 |
液体 10 mL×1 瓶 |
2-8℃保存 |
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标准品 |
液体 59.3 μL×1 支 |
2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 标准品：临用前加入 1.97 mL 甲苯，即 100 μmol/mL 油酸。用前注意解冻溶解。用不完的试剂可以 2-8℃，保存一个月。
2、 工作液的配制：将试剂三临用前加入 16 mL 蒸馏水于沸水浴中溶解，2-8℃保存两周。冷却至常温后加入4 mL 试剂二混合，高速震荡 2 次，每次 3min，间隔 5min。可根据该比例现用现配。
脂肪酶（LPS）又称甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和单酯）。该酶在 土壤生物动力学中具有重要的作用。
LPS催化油酯水解成脂肪酸，利用铜皂法测定脂肪酸生成速率，即可计算LPS活性。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔UV板（非聚苯乙烯材质）、台式离心机、震荡混匀器、恒温 水浴锅/恒温培养箱、可调式移液枪、研钵、甲苯（不可快递）、冰和蒸馏水、30-50目筛。
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
新鲜土样自然风干，过30-50目筛。
1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至710nm，分光光度计用甲苯调零。
2、 标准溶液的稀释：取50µL 100µmol/mL油酸标准溶液，加入950µL甲苯，充分混匀，配制成5µmol/mL标准溶液待测，现用现配。（实验中每管需要300µL，为减小实验误差，故配制大体积。）
3、 操作表：取1.5mL EP管，加入下列试剂
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加入试剂（μL） |
对照管 |
测定管 |
标准管 |
空白管 |
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土样（g） |
0.03 |
0.03 |
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甲苯 |
15 |
15 |
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使土样充分润湿，常温放置 10min。 |
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试剂一 |
150 |
150 |
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工作液 |
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150 |
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置于 37℃恒温培养箱或 37℃恒温水浴锅中准确反应 1h，期间可震荡数次使土样和样本充分接触。之后沸水浴 10min（缠封 口膜，防止 EP 管崩开导致水分散失），自然冷却至室温。 |
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工作液 |
150 |
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甲苯 |
360 |
360 |
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反复震荡混匀后，室温 4000rpm 离心 10 min |
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取出离心管，小心吸取上层有机相 0.3mL，加入另一 1.5mL EP 管中，按下表操作：
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上层溶液 |
300 |
300 |
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5µmol/mL 标准溶液 |
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300 |
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甲苯 |
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- |
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300 |
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试剂四 |
75 |
75 |
75 |
75 |
反复充分震荡混匀；室温 4000rpm 离心 10min，小心吸取有机相溶液 200μL，加入微量玻璃比色皿/96 孔 UV 板中，于 710nm 处测定吸光值。记为 A 对照管、A 测定管、A 标准管、A 空白管，计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。空白管和标准管只需做 1-2 次。
活性单位定义：37℃中每g土样每天水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。
S-LPS (U/g 土样) =ΔA测定÷（ΔA标准÷C标准）×V甲苯÷T÷W=43.2×ΔA测定÷ΔA标准÷W
V甲苯：加入的甲苯体积，0.36mL；C标准：标准溶液浓度，5µmol/mL；T：催化反应时间，1/24d；W：样本质量，g。
1、甲苯有毒，实验过程中需佩戴手套和口罩。
2、实验过程中须远离火源。
3、当吸光度大于 0.8 时，建议将样本稀释后测量（第二次加入甲苯的量增加）。
4、甲苯可溶解聚苯乙烯/聚丙烯材质。
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