土壤脂肪酶(S-LPS)活性检测试剂盒



上海液质是一家拥有12000多种高端成熟型生化elisa土壤植物细胞等试剂盒的生产厂家,并承接生化代测Elisa代测HPLC 检测GC检测GC-MS 检测LC-MS检测ICP-MS检测 、土壤植物动物成分酶活检测等科研检测服务。如有需要立即询购

货号:UPLC-MS-4047          规格: 100T/48S            微量法

  货号:UPLC-MS-4046           规格: 50T/24S            可见分光光度法

产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称

规格

保存条件

试剂一

液体 15 mL×1

2-8℃保存

试剂二

液体 5 mL×1

常温保存

试剂三

粉剂×1

2-8℃保存

试剂四

液体 10 mL×1

2-8℃保存

标准品

液体 59.3 μL×1

2-8℃保存

溶液的配制:

1 标准品:临用前加入 1.97 mL 甲苯,即 100 μmol/mL 油酸。用前注意解冻溶解。用不完的试剂可以 2-8℃,保存一个月。

2 工作液的配制:将试剂三临用前加入 16 mL 蒸馏水于沸水浴中溶解,2-8℃保存两周。冷却至常温后加入4 mL 试剂二混合,高速震荡 2 次,每次 3min,间隔 5min。可根据该比例现用现配。

产品说明:

脂肪酶(LPS)又称甘油酯水解酶,催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油(或者甘油二酯和单酯)。该酶在   土壤生物动力学中具有重要的作用。

LPS催化油酯水解成脂肪酸,利用铜皂法测定脂肪酸生成速率,即可计算LPS活性。

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔UV板(非聚苯乙烯材质)、台式离心机、震荡混匀器、恒温   水浴锅/恒温培养箱、可调式移液枪、研钵、甲苯(不可快递)、冰和蒸馏水、30-50目筛。

操作步骤:

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献) 

新鲜土样自然风干,过30-50目筛。

二、测定步骤

1 分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至710nm,分光光度计用甲苯调零。

2 标准溶液的稀释:取50µL 100µmol/mL油酸标准溶液,加入950µL甲苯,充分混匀,配制成5µmol/mL标准溶液待测,现用现配。(实验中每管需要300µL,为减小实验误差,故配制大体积。)

3、 操作表:取1.5mL EP管,加入下列试剂

加入试剂(μL

对照管

测定管

标准管

空白管

土样(g

0.03

0.03

-

-

甲苯

15

15

-

-

使土样充分润湿,常温放置 10min

-

-

试剂一

150

150

-

-

工作液

-

150

-

-

置于 37℃恒温培养箱或 37℃恒温水浴锅中准确反应 1h,期间可震荡数次使土样和样本充分接触。之后沸水浴 10min缠封

口膜,防止 EP 管崩开导致水分散失),自然冷却至室温。

-

-

工作液

150

-

-

-

甲苯

360

360

-

-

反复震荡混匀后,室温 4000rpm 离心 10 min

-

-

取出离心管,小心吸取上层有机相 0.3mL,加入另一 1.5mL EP 管中,按下表操作:

上层溶液

300

300

-

-

5µmol/mL 标准溶液

-

-

300

-

甲苯

-

-

-

300

试剂四

75

75

75

75

反复充分震荡混匀;室温 4000rpm 离心 10min,小心吸取有机相溶液 200μL,加入微量玻璃比色皿/96 UV 板中,于 710nm 处测定吸光值。记为 A 对照管、A 测定管、A 标准管、A 空白管,计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。空白管和标准管只需做 1-2 次。

三、S-LPS 活性计算

活性单位定义:37℃中每g土样每天水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。

S-LPS (U/g  土样) =ΔA测定÷(ΔA标准÷C标准)×V甲苯÷T÷W=43.2×ΔA测定÷ΔA标准÷W

V甲苯:加入的甲苯体积,0.36mL;C标准:标准溶液浓度,5µmol/mL;T:催化反应时间,1/24d;W:样本质量,g。

注意事项:

1、甲苯有毒,实验过程中需佩戴手套和口罩。

2、实验过程中须远离火源。

3、当吸光度大于 0.8 时,建议将样本稀释后测量(第二次加入甲苯的量增加)。

4、甲苯可溶解聚苯乙烯/聚丙烯材质。

 


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